中华人民共和国国家标准
GB/T35809-2018
Method for analysis of forestry biomass-Determination of protein content
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由国家林业局提出.
本标准由全国林业生物质材料标准化技术委员会（SAC/TC416）归口.
本标准起草单位：北京林业大学、济南海能仪器股份有限公司、廊坊华日家具股份有限公司、山东理工大学、山东绿森塑木复合材料有限公司、浙江省林业科学院、厦门标普标准化服务有限公司、中国林业科学院木材工业研究所.
本标准主要起草人：任学勇、常建民、陈凤义、贸亮、王志刚、刘丰祥、刘毅、张扬、张柏林、赵宏飞、易维明、蔡红珍、郭京雷、许金飞、范东斌.
林业生物质原料分析方法 蛋白质含量测定
1范围
本标准规定了测定林业生物质原料中蛋白质含量的方法、试剂与材料、仅器与设备、分析步骤以及结果表述等.
本标准适用于木材、竹材、滕材、树皮、树叶、果壳等林业生物质原料.
本标准采用凯氏定氮法和社马斯燃烧法等两种方法，前者是测定蛋白质含量的经典方法，适用于各种林业生物质原料：后者是一种快速测定蛋白质含量的高效方法，在批量快速检测林业生物质原料时推荐使用.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T30366-2013生物质术语
3术语和定义
GB/T30366一2013界定的以及下列术语和定文适用于本文件.
3.1
林业生物质forestry biomass
林业生产和加工过程中产生的生物质，主要包括林产品（如本材、竹材、滕材等）林业剩余物（如枝能源林等. Y、锯末、木肩、梢头、板皮和截头、果壳和果核等采伐剩余物和加工剩余物、造纸废弃物以及废弃木材）、
[GB/T 30366-2013 定义2.1.3]
4凯氏定氮法
4.1原理
林业生物质原料中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨气与硫酸结合生成硫酸铵，碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量确定氮含量后乘以氮换算为蛋白质的系数，即可得到原料中蛋白质的含量.
4.2试剂与材料
本标准方法中所用试剂均为分析纯（另有规定的除外），水为蒸馏水或者去离子水.
4.2.1硫酸铜（CuSO；5HO）4.2.2硫酸钾（KSO）.4.2.3硫酸（H;SO）:密度为1.84g/L.
4.2.5甲基红指示剂（C；HNO）4.2.6澳甲酚绿指示剂（CHBrOS）4.2.7亚甲基蓝指示剂（C，HCIN S3HO)4.2.995%乙醇(C;H;(OH）.4.2.10硼酸溶液（20g/L）：称取20g硼酸，加水溶解后并稀释至1000mL，4.2.11氢氧化钠溶液（400g/L）：称取40g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100mL. 4.2.12硫酸标准滴定溶液（0.0500mol/L）或盐酸标准滴定溶液（0.0500mol/L）.4.2.13甲基红乙醇溶液（1g/L）：称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL.“012%62%6由8101）2由4.2.15混合指示液：1份甲基红乙醇溶液（4.2.13）与5份澳甲酚绿乙醇溶液（4.2.14）临用时混合.
4.2.4硼酸（H，BO）.
4.2.8氢氧化钠（NaOH）.
4.3仪器与设备
4.3.2定氮蒸馏装置：如图1所示.
4.3.1天平；测量精度为0.0001g.
4.3.3自动凯氏定氮仪.
说明：
图1定氨蒸馏装置图
4.4分析步骤
4.4.1手动凯氏定氮法
4.4.1.1试样处理：首先将生物质材料粉碎至40目以上的颗粒，干燥至水分绝干状态.称取充分混匀的固体试样1g~2g精确至0.0001g，移人干燥的250mL定氮瓶（硝化瓶）中，加人0.2g硫酸铜 （4.2.1）、6g硫酸钾（4.2.2）及20mL硫酸（4.2.3），轻摇后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小2
孔的石棉网上.小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色并澄清透明后，再继续加热0.5h~1h.取下放冷，小心加人20mL水.放冷后，移人100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并人容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用.同时做试剂空白试验.
4.4.1.2测定：按图1装好定氮蒸馏装置，向水蒸气发生器内装水至2/3处加人数粒玻璃珠，加甲基红乙醇溶液（4.2.13）数滴及数毫升硫酸（4.2.3），以保持水呈酸性，加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持沸腾.向接收瓶内加人10.0mL硼酸溶液（4.2.10）及1~2滴混合指示液（4.2.15），并使冷凝管的下端插入液面下，根据试样中氮含量，准确吸取2.0mL~10.0mL试样处理液由小玻杯注入反应室，以10mL 水洗涤小玻杯并使之流人反应室内，随后塞紧棒状玻塞.将10.0mL氢氧化钠溶液（4.2.11）倒人小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气，夹紧螺旋夹，开始蒸馏.蒸馏10min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管溶液（4.2.13）与5份溴甲酚绿乙醇溶液（4.2.14）指示剂所配成的混合指示液颜色由酒红色变成绿色， 下端外部，取下蒸馏液接收瓶.以硫酸或盐酸标准滴定溶液（4.2.12）滴定至终点，其中1份甲基红乙醇pH5.1.同时作试剂空白.
4.4.2自动凯氏定氮仪法
将生物质材料粉碎至40目以上的颗粒，干燥至水分绝干状态，称取试样1g~2g.精确至0.0001g.按照仪器说明书的要求进行检测.
4.5结果的计算
试样中蛋白质的含量按式(1)进行计算.
式中：
X 试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）；V 一试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（mL）；V V: 一吸取消化液的体积，单位为毫升（mL）； "一试剂空白消耗硫酸或盐酸标注滴定液的体积，单位为毫升（mL）：c 硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L)：0.014 01.0 mL 硫酸[c（1/2HSO)=1.000mol/L]或盐酸[c（HC1)=1.000mol/L]标准滴定m试样的绝干质量，单位为克（g）； 溶液相当的氮的质量，单位为克（g）；6.25一氮含量换算为蛋白质含量的转换系数.
时，结果保留三位有效数字：蛋白质含量小于1g/100g时，结果保留两位有效数字. 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，当蛋白质含量大于或等于1g/100g
4.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
5杜马斯燃烧法
5.1原理
林业生物质原料试样在900℃C~1200C高温下燃烧产生混合气体，其中的碳、硫等干扰气体和盐类被吸收管吸收，氮氧化物被全部还原成氮气，形成的氮气气流通过热导检测仪（TCD）进行检测，根据 所测定到的氮含量乘以氮换算为蛋白质的系数，即得到原料中蛋白质的含量.
