T/GXAS
T/GXAS969-2025
E and F species detection of bovine enterovirus byreal-time fluorescentquantitativeRT-PCR
前言
本文件参照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由广西兽医协会提出、归口并宣贯.
本文件起草单位：广西悦牧生物科技有限公司、防城港市动物疫病预防控制中心、广西壮族自治区动物疫病预防控制中心、广西农业职业技术大学.
宋星桔、陆春礼、韦成威、苏文广、陈秋英、刘胜平、苏子庭、吕思明、周媛、梁风、侯慧贤、韦芳、 本文件主要起草人：谢守玉、莫模双、张红云、黄张玲、周明旭、杨丽雪、汤迪沔、欧莹、罗湘尹、黄湘华、张文菲、廖秋妮、黄百花、唐云姣、覃海、袁成进、裴幸彪、曹显永、韦志、陈梦、磨玉武、廖丽彬、王德玺、童彬、袁洪福、孙晓琳、韦东力、黄玉淑、熊嘉雪、蓝鑫婷、利茵、吴万佳、林斌、 蒋大平、熊毅.
E种和F种牛肠道病毒的检测实时荧光定量RT-PCR法
1范围
和材料、仪器设备、试验步骤技术要求. 本文件界定了E种和F种牛肠道病毒的检测实时荧光定量RT-PCR法涉及的术语和定义、原理、试剂
本文件适用干采用实时荧光定量RT-PCR法对E种和F种牛肠道病毒核酸的检测.
2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件.
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
牛肠道病毒bovineenterovirus，BEV
在宿主的肠道细胞中繁殖，引起病牛腹泻或隐性感染等症状的微核糖核酸病毒科肠道病毒属成员.注：肠道病毒属包括12个肠道病毒种（A~L），主要感染牛的是E种BEV（BEV-E）和F种BEV（BEV-F）.
荧光报告基团reporter
在一定的激发条件下，用于监测生物体系中的分子活性、物质变化等的一种特殊的化学物质.
荧光淬灭基团black hole quencher，BHQ
通过吸收荧光基团的光能，将其转化为热能或其他形式的能量，从而使荧光基团无法发光的一种能够抑制荧光发射的化合物.
实时荧光定量RT-PCRreal-timefluorescent quantitative RT-PCR，qRT-PCR
通过检测PCR反应过程中释放的荧光信号来定量检测目标核酸含量的一种分子生物学技术.
6-骏基荧光素6-carboxyfluorescein，FAM
一种主要用于核酸检测和标记的羧基荧光素同分异构体.
3.6Ct值cycle threshold，Ct
检测到靶序列的荧光信号达到设定的阔值所经历的PCR循环数.
下列缩略语适用于本文件.EDTA:乙二胺四乙酸（Ethylene diamine tetraacetic acid）.LB: LuriaBertani . PCR:聚合离链式反应（Polymerase chainreaction）.PBS:磷酸盐缓冲液（Phosphate buffered solution）.
5原理
探针.探针5'端标记一个荧光报告基团，3"端标记一个荧光淬灭基团.当PCR扩增时，探针被酶切降解， 根据BEV-E和BEV-F基因组序列共同保守片段，设计合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记
