NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1858.4-2010
番茄主要病害抗病性鉴定技术规程 第4部分：番茄抗青枯病鉴定技术规程
Rulesforevaluation of tomatoforresistance to diseasesPart4:Rule for evaluation of tomato for resistance to bacterialwilt
中华人民共和国农业部发布
前言
NY/T1858-2010《番茄主要病害抗病性鉴定技术规程》为系列标准，共8部分：
-第1部分：番茄抗晚疫病鉴定技术规程；一-第2部分：番茄抗叶霉病鉴定技术规程； -第3部分：番茄抗枯萎病鉴定技术规程；一第4部分：番茄抗青枯病鉴定技术规程；第5部分：番茄抗疮瘤病鉴定技术规程；-第6部分：番茄抗番茄花叶病毒病鉴定技术规程： 第7部分：番茄抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程；一第8部分：番茄抗南方根结线虫病鉴定技术规程.本部分为NY/T1858-2010的第4部分.本部分的附录A为资料性附录.本部分由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口. 本部分起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所，本部分主要起草人：谢丙炎、冯兰香、杨字红、杨翠荣、龚惠芝.
番茄主要病害抗病性鉴定技术规程 第4部分：番茄抗青枯病鉴定技术规程
1范围
本部分规定了番茄抗青枯病鉴定的术语和定义、接种体制备、鉴定条件和试验设计、接种、病情调查、抗病性评价以及鉴定记载表格.
本部分适用于栽培番茄（SolamumLycopersicumL）自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生番茄和番茄近缘种对番茄青枯病抗性的室内苗期鉴定和评价.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本部分.
2.1
番茄青枯病Tomatobacterialwilt
地发病重.多数植株在现蕾期和开花初期开始表现症状，初起顶端叶片中午萎，早晚恢复，随后下、中 由茄假单胞杆菌[Ralstonia solamacearun（Smith）Yabuuchi etaL]引起的土传病害，尤以南方连作部叶片凋萎，数天后整急剧萎端，但叶片仍为绿色，呈现青枯症状；病株的茎基部及根部维管束变褐，横切新鲜病蒸插人清水中，可见乳白色细菌液从维管束溢出.
2. 2
病原分离物pathogenicisolate
采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原物的纯培养物.
生理小种physiologicalrace
病原物种内或专化型内在形态上无差异，但在寄主植物的品种上具有显著致病性差异的类群.
签别寄主diagnostic host
用于鉴定和区分特定病原物的生理小种/致病型/株系的一套带有不同抗性基因的寄主品种、品系或材料.
2.5
致病性pathogenicity
病原物所具有的破坏寄主植物和引起病变的能力.
2.6
可以使病原物生长的、自然的或人工配制的基质.
用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分.
2.8
接种悬浮液inoculumsuspension
NY/T 1858.4-2010
用于接种的含有定量接种体的液体.
2.9
在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体的适当部位并使之发病的过程.
2. 11
病情指数disease index（DI）
抗病性disease resistance
植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状.
2. 13
2. 14
抗性评价evaluation ofresistance levels
根据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述.
3接种体制备
3.1病原物分离
以常规组织分离法，从病茎的褐色维管束组织中分离青枯病病原物，分离物经寄主范围、培养性状、生理生化反应和形态学鉴定确认为劳尔氏菌属茄假单胞杆菌后，再进行分离物纯化和致病性测定，并保存备用.
3.2生理小种鉴定
对用于抗病性鉴定接种的病原分离物进行生理小种鉴定.鉴定方法参照附录A的A.2.
3.3接种体繁殖和保存
3.3.1接种体繁殖
将保存在灭菌蒸馏水中的青枯菌菌落挑起、拌匀，沾取一接种环菌液在TZC培养基平板上划线，30℃培养36h~48h后，选取较大、白边较宽、中央粉红色、似有流动感的菌落（为毒性菌落）转移到TTC基础培养基上，扩大培养36h~48h，加灭菌蒸馏水配成细菌浓度约为1X10°cfu/mL的接种悬浮液.
TTC基础培养基的制备：葡萄糖5g，蛋白陈10g，水解酪蛋白1g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，酸碱度调节到pH7.2，加热熔化，分装在试管或锥形瓶中，高压灭菌（121C，20min）.
氯化四氮唑水溶液，使终浓度为0.005%，摇匀.
3.3.2接种体保存
将TTC斜面培养基上的新鲜青枯病菌用灭菌蒸馏水洗下，或者挑取菌落放入灭菌蒸馏水中，在室温下保存.
4鉴定条件和试验设计
4.1鉴定室
NY/T 1858.4-2010
苗期抗病性鉴定的鉴定室能够人工调节室内温度、湿度和光照，使之具备良好的发病环境.
4.2鉴定设计
鉴定材料随机排列或顾序排列，每份鉴定材料重复3次，每一重复10株苗.
4.3鉴定对照材料
4.4鉴定材料育苗
鉴定材料的种子经10%次氯酸钠溶液浸泡10min，清水冲洗后置于恒温培养箱中28°℃催芽，播种于育苗筐内.育苗基质为草炭、蛭石和菜田土（2：1：1），经高温蒸汽灭菌（134℃，30min）后方可使用.在日光温室里育苗，室内温度18℃~25℃.幼苗应生长健壮、一致.
5接种
5.1接种时期
幼苗在5~6片真叶期进行接种.
5.2接种方法
采用浸根法接种.拔起幼苗并用清水将根系冲洗干净，然后将整个根系在接种悬浮液中浸泡10min，再移栽到苗体.
5.3接种后的管理
接种后室内温度白天为28℃~32℃，夜间为20℃~22℃，土壤湿度85%~90%，每天光照12h~14h，强度为35klx，正常裁培管理.
6病情调查
6.1病情级别划分
幼苗病情级别及其相对应的症状描述见表1.
表1番茄青枯病病情级别的划分
病情级别 症状描述0 无症状1 1片叶萎费2 2~3片叶萎薄3 除顶部2一3片叶外，其他叶片均萎端4 整株叶片萎篇
6.2调查时间
接种后约21d进行.
6.3病情记载
调查记载每一鉴定植株的病情级别，并计算病情指数.
病情指数按公式（1）计算：
DI = ∑（s×n） ×100 （1)NXS
式中：
DI--病情指数；
-各病情级别的代表数值：
