NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1858.6-2010
番茄主要病害抗病性鉴定技术规程 第6部分：番茄抗番茄花叶病毒病 鉴定技术规程
Rules for evaluation of tomato for resistance to diseasesPart 6:Rule for evaluation of tomato for resistance to tomato mosaic virus
中华人民共和国农业部发布
前言
NY/T1858一2010《番茄主要病害抗病性鉴定技术规程》为系列标准，共8部分：
第1部分：番茄抗晚疫病鉴定技术规程；一第2部分：番茄抗叶霉病鉴定技术规程；第3部分：番茄抗枯萎病鉴定技术规程； 一第4部分：番茄抗青枯病鉴定技术规程；第5部分：番茄抗疮癫病鉴定技术规程；第6部分：番茄抗番茄花叶病毒病鉴定技术规程；-第7部分：番茄抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程； -第8部分：番茄抗南方根结线虫病鉴定技术规程.本部分为NY/T1858-2010的第6部分.本部分的附录A为资料性附录.本部分由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口.本部分起草单位：中国农业科学院蔬莱花卉研究所. 本部分主要起草人：谢丙炎、冯兰香、杨宇红、杨率荣、龚惠芝.
番茄主要病害抗病性鉴定技术规程 第6部分：番茄抗番茄花叶病毒病鉴定技术规程
1范围
病情调查、抗病性评价以及鉴定记载表格. 本部分规定了番茄抗番茄花叶病毒病鉴定的术语和定义、接种体制备、鉴定条件和试验设计、接种、
本部分适用于裁培番茄（SolamumycopersicumL）自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生番茄和番茄近缘种对番茄花叶病毒病抗性的室内苗期鉴定和评价.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本部分.
2. 1
番茄花叶病毒病Tomatomosaicvirus
片偏小、稍为皱缩.病株时叶脉、叶柄和茎部往往出现长、短不一的坏死斑，果面也产生坏死斑；重病株 由番茄花叶病毒（Tomatomosaicvirws，ToMV）所引起的病毒性病害.病株呈现系统花叶，有病叶稍矮化.
2.2
病原分离物pathogenicisolate
采用人工方法，从植物发病部位分离获得的病原物的纯培养物.
2.3
株系strain
同种病毒中不同来源的、血清学相关的，但生物学性状不完全相同，或对不同寄主植物及不同品种具有致病力差异的变异类群.
2. 4
鉴别寄主diagnostic host
用于鉴定和区分特定病原物的生理小种/致病型/株系的一套带有不同抗性基因的寄主品种、品系或材料.
2.5
致病性pathogenicity
病原物所具有的破坏寄主植物和引起病变的能力.
2.6
用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分.
接种悬浮液inoculum suspension
用于接种的含有定量接种体的液体.
2.8
人工接种artificial inoculation
NY/T 1858.62010
在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体的适当部位并使之发病的过程.
2.9
人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述.
2. 10 病情指数diseaseindex（DI)通过对植株个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式.2. 11抗病性disease resistance
植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状.
2. 12
抗病性鉴定evaluation ofdisease resistance
通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平.
2. 13抗性评价evaluation ofresistance levels
根据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述.
3接种体制备
3.1病原物分离
以常规汁液摩擦法，从具有典型番茄花叶病毒病症状的病叶上分离病原物.分离物经血清学、寄主范图、枯斑寄主、理化性状及传播方式测定，电子显微镜观察病毒粒子形态等方法鉴定，确认为番茄花叶病毒后，再进行分离物纯化和致病性测定，保存备用.
3.2株系鉴定
用于抗病性鉴定接种的病毒分离物首先进行株系鉴定，签定方法参照附录A的A2.
3.3接种体繁殖和保存
3.3.1接种体繁殖
取少量番茄花叶病毒供试株系的新鲜病叶摩擦接种在“丽春”或“Moneymaker”番茄的健康叶片上，置防虫温室内（25℃~28℃）培养约2周，采收病叶.1g鲜病叶加50mL的0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）匀浆，纱布过滤或3000r/min离心15min，其滤液或上清液为接种悬浮液.
3.3.2接种体保存
一种方法是将番茄花叶病毒不同的株系接种在不同的番茄品种上，即0株系、1株系、2株系和1.2株系分别接种在GCR26（或丽春番茄）、GCR237、GCR526和GCR254番茄植株上，置防虫温室内长期保存，缺点是病毒容易被污染；另一种方法是将番茄花叶病毒不同株系的新鲜病叶制作成冻干叶，在-20℃以下可保存2~3年.
续铺放数层，但各层吸水纸之间应用硅胶或氯化钙隔开，然后置于密封的容器里，再将容器置于4C冰 冻干病叶的简易制作法：将新鲜病叶用灭菌剪刀剪成小块，在吸水纸上均匀地铺放一层，可照此连箱，头两天每天更换一次干燥剂，以后每两天更换一次，直到碎病叶彻底干燥，整个制作过程应防止其他病毒的污染.
4鉴定条件和试验设计
4.1鉴定室
苗期抗病性鉴定的鉴定室可调节温度和光照的防虫日光温室，使之具备良好的发病环境.
4.2鉴定设计
签定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一重复10株苗.
4.3鉴定对照材料
设“丽春”或"Moneymaker"番茄为感病对照品种：抗病对照品种依接种的病毒株系面定，如接种0株系用GCR237番茄，1株系用GCR236番茄.
4.4鉴定材料育苗
鉴定种子在10%磷酸三钠溶液中浸泡15min，清水冲洗后置于恒温培养箱中28℃催芽，播种于育苗筐内.育苗基质为草炭、蛭石和菜田土（2：1：1)，经高温蒸汽灭菌（134℃，30min）.在日光温室里育苗，室内温度为18℃~25℃.幼苗应生长健壮、一致.
5接种
5.1接种时期
幼苗在2~3片真叶期进行接种.
5.2接种方法
接种前，将番茄幼苗经黑暗处理一昼夜，再在叶面上撒一薄层600目金刚砂.常用两种接种方法：少量鉴定可采用摩擦接种法，即充分洗净的手指取接种悬浮液，在叶面轻度摩擦造成微伤，每株苗接 种第1~2片真叶；大量鉴定采用喷枪接种法，即喷枪的杯内盛接种悬浮液，喷枪嘴距叶片约2cm，空气压缩机压力为205.9kPa~245.1kPa.接种后立即用清水冲洗叶面上多余的病毒汁液.无论采用哪种接种方法，一般需接种两次，间隔3d~5d
5.3接种后的管理
照，正常裁培管理. 接种当天的室内温度为25℃~28℃，以后白天温度为22℃~28℃，夜间温度为20℃~22℃，常规光
6病情调查
6.1病情级别划分
幼苗病情级别及其相对应的症状描述见表1.
表1番茄花叶病毒病病情级别的划分
病情级别 无症状 症状描述0 1 心叶的叶脉为明脉，1~2片真叶呈现花叶3 中上部叶片花叶7 5 多数叶片花叶，少数叶片畸形 多数叶片为重花叶、畸形、皱缩9 几乎叶片都为重花叶、畸形、皱缩，植株矮化较明显
6.2调查时间
接种后约21d进行.
6.3病情记载
调查记载每一鉴定植株的病情级别，并计算病情指数.
病情指数按公式（1）计算：
∑（sXn)DI
