中华人民共和国水产行业标准
SC/T 9462-2025
Determination of strontium andcalcium concentrations infish otolithElectron probemicroanalysis
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出.本文件由全国水产标准化技术委员会渔业资源分技术委员会（SAC/TC156/SC10）归口.本文件起草单位：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心.
本文件主要起草人：杨健、姜涛、刘洪波、陈修报、朱亚华、薛峻仁、阔明军.
鱼类耳石锶钙定量测定电子探针法
1范围
本文件描述了电子探针法测定鱼类耳石钙元素含量及其比值的测定原理，给出了测定所需的试剂述了对应的证实方法. 和材料、仪器设备，规定了样品采集与保存、处理与检测步骤、检测数据处理以及质量控制的技术要求，描
本文件适用于鱼类耳石的电子探针法锡钙元素的定量分析.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T15074电子探针定量分析方法通则
GB/T4930-2021微束分析电子探针显微分析标准样品技术条件导则
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3. 1
耳石otolith
鱼类内耳膜速路内的钙化硬组织，主要成分为碳酸钙，分为矢耳石、星耳石和微耳石3对.
4原理
区表面元素组分激发出特征波长的X射线，通过谱仪对X射线进行分光，测量相应元素的特征X射线强 度，并使之与相同条件下标准品所测得的对应元素X射线强度进行比较，计算获得耳石样品被激发区的对应元素含量值.
5试剂和材料
5.1去离子水：电阻率≥10MΩcm5.2无水乙醇（C：HO）：化学纯.500ml.5.3培养板：48孔亚克力细胞培养板，带盖.5.4环氧树脂黏合剂：分A剂（环氧树脂）和B剂（减固剂）.混合后室温凝固.5.5硅胶模具：直径2cm，高3cm，围柱形.5.7载玻片：厚度1.2mm~1.5mm. 5.6环氧树脂：冷镶嵌型，1L.5.8粗砂纸：500目.5.9细砂纸：2000目.5.10抛光布：橡胶抛光布搭配抛光液使用.5.11抛光液：二氧化硅型抛光液，粒度0.25μm，41
5.12标准品：按GB/T4930一2021的要求，选用钛酸锂标样分析耳石中的锡元素，碳酸钙标样分析耳石中的钙元素.
SC/T 9462-2025
6仪器设备
6.2烘箱：30℃~40℃恒温干燥. 6.1解剖工具：摄子、剪刀6.3切期机；转速300r/min，锯片厚度1mm~2mm.6.4打磨机：搭配砂纸使用，转速50r/min~200r/min6.5金相显微镜：正置、总故大倍数50倍~600倍，配有透、反射光2种光源，6.6抛光机，搭配抛光布和抛光液使用，转速100r/min~300r/min.6.7超产清洗机：工作频率40kHz.6.8真空镀碳仪：真空度2X10Pa，镀膜电流36A.6.9电子探针显微分析仪：能进行锯原子M层电子跃迁至L层产生的La特征X射线以及钙原子L层 电子跃迁至K层产生的Ka特征X射线测定，检测极限可达0.01wt%.
7样品
7.1鱼类样品运输与保存
蚀作用的试剂保存标本. 鱼类样品以冷藏或酒精浸泡的方式运回实验室后，冷冻保存，期间不可使用福尔马林等对耳石有腐
7.2耳石样品处理
按以下步骤进行：
a）使用解副工具（6.1）摘取鱼类耳石，用去离子水（5.1）冲洗耳石3min~4min，去除黏液和包膜；用无水乙醇（5.2）浸泡清洗耳石表面1min~2min，去除有机质：镜检确保无残留有机质后，将耳 石移人48孔培养板（5.3），放人烘箱（6.2）35℃C~38℃干燥10h~15h，b）对于鲤科鱼类，按微耳石、星耳石、矢耳石的顺序选取，其他鱼类按矢耳石、微耳石、星耳石的顺序选取待处理的耳石样品.如首选顺序耳石不可用（如破损或缺失），按可使用的其他2个耳石顺c）使用环氧树脂黏合剂（5.4）将耳石固定在硅胶模具（5.5）底部，倒入环氧树脂（5.6）进行包埋 序选取，固定.d）树脂凝固后，按耳石剖面（优先选择矢状面，其次为横截面）平行于载玻片的方向，用环氧树脂黏合剂（5.4）将树脂块黏贴并固定在载玻片上（5.7)，充分按压去除气泡和多余黏合剂，待粘合剂充1 mm 左右. 分凝固后，使用切割机（6.3）切除多余树脂部分，使拟打磨截面包理树脂与耳石之间的厚度达e）使用打磨机（6.4）先后搭配租砂纸（5.8）、细砂纸（5.9）打磨样品，至金相显微镜（6.5）透射和反射光光源下均能够清晰观察到耳石核心，f）使用抛光机（6.6）搭配抛光布（5.10）和抛光液（5.11）对打磨好的样品进行抛光，利用金相显微镜 （6.5）确认抛光至耳石核心，表面无明显划痕.g）使用超声清洗机（6.7）清洗耳石样品5min后放入烘箱（6.2）35℃～38℃烘干12h以上.h）使用真空镀碳仪（6.8）蒸镀碳膜后获得待测耳石样品，参考GB/T28634-2012碳膜厚度控制在20 nm 左右.
8检测
8.1检测步骤
按GB/T15074规定的方法开展定量线分析，具体按以下步骤进行：a）电子探针显微分析仪（6.9）开机预热30min以上.b）用电子探针的二次电子像确定分析部位，调节焦距、对比度和亮度.
