中华人民共和国国家标准
GB23200.117-2019
食品安全国家标准 植物源性食品中喹啉铜残留量的测定 高效液相色谱法
Nationalfoodsafetystandard-Determination of oxine-copper residue infoods of plant origin
Highperformance liquid chromatography
食品安全国家标准 植物源性食品中喹啉铜残留量的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了植物源性食品中唑喀铜残留量的高效液相色谱测定方法.本标准适用于植物源性食品中喹啉铜残留量的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中残留的喹啉铜，用1%草酸溶液提取，亲水亲脂平衡的水可浸润性的反相固相萃取柱净化，1%草酸水溶液复溶，用带有紫外检测器的高效液相色谱测定，外标法定量.
4试剂与材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为色谱纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1草酸（CHO CAS号：144-62-7)：分析纯.4.1.2甲醇（CH OH，CAS号：67561).
1.2溶液配制
4.2.1草酸溶液（10g/L)：称取10g草酸加水溶解用水定容至1L.4.2.2氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取4g氢氧化钠.用水溶解并稀释至100mL.4.2.3淋洗液：甲醇一水溶液（19.体积比）：量取100mL甲醇，加人到900mL水中.混匀.4.2.4洗脱液：草酸甲醇溶液（10g/L)，称取1g草酸，用100ml.甲醇溶解，混匀.4.2.5流动相A：称取1.26g草酸，用水溶解并定容至1L.过0.22pm有机滤膜，现用现配.
4.3标准品
喹咻铜(C HNOCu CAS号:-6):纯度≥98%.
4.4标准溶液配制
4.4.1喹啉铜标准储备溶液（100mg/L)：称取10mg（精确至0.1mg）唑啉铜标准品于100mL聚丙烯容量瓶中，用甲醇溶解后定容，作为标准储备溶液，一18C以下保存，有效期6个月.丙烯容量瓶中，用甲醇定容，配制成标准工作溶液，0℃～5"保存，有效期1个月.
GB 23200. 117-2019
4.5.3亲水亲脂平衡的水可浸润性的反相固相萃取柱（HLB固相萃取柱）：200mg.6mL，或相当者.4.5.4精密pH试纸：pH 2.7~4.7.
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或者二极管阵列检测器，5.2分析天平：感量0.1mg和感量0.01g.5.3容量瓶：1L.5.4聚丙烯广口瓶：250ml.5.5聚丙烯容量瓶：100ml.5.6聚丙烯试管：10ml.5.7聚丙烯离心管：150mL. 5.8振荡仪.5.9离心机：≥5000r/min.5.10氮吹仪.5.11涡旋振荡合器.5.12固相萃取装置.
6试样制备
蔬菜、水果和食用菌样品按相关标准取一定量，样品取样部位按GB2763的规定执行.对于个体较小的样品，取样后全部处理：对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放人组织捣碎机中捣碎成匀浆，匀浆放入聚乙烯容器中.
茶叶、坚果和香辛料样品各500g粉碎后充分混匀，放人聚乙烯瓶或袋中. 取谷类样品500g，粉碎后使其全部可通过425μm的标准网筛，放人聚乙烯瓶或袋中.取油料作物、
植物油类样品搅拌均匀.
试样于-20℃～-16℃条件下保存.
7分析步骤
7.1提取
7.1.1蔬菜、水果、植物油和食用菌
称取10g（精确至0.01g）试样于250mL聚丙烯广口瓶中，加人90mL草酸溶液（4.2.1），振荡提取1 h，转移至离心管（5.7）.4000r/min离心5min，上清液（植物油取水相层）转移至100mL聚丙烯容量瓶，用草酸溶液定容至100mL，准确移取10mL提取液过聚乙烯筛板（4.5.2），然后用氢氧化钠溶液 （4.2.2）调节pH至3，待净化.
7.1.2谷物、油料、坚果
称取5g（精确至0.01g）试样于250mL聚丙烯广口瓶中，准确加入100mL草酸溶液（4.2.1)，振荡提取1h，转移至离心管（5.7），4000r/min离心5min，取10mL上清液用氢氧化钠溶液（4.2.2）调节pH至3，4000r/min离心5min，取上清液过聚乙烯筛板（4.5.2），待净化.
7.1.3茶叶和香辛料
称取5g试样（精确至0.01g）于250mL聚丙烯广口瓶中，准确加人100mL草酸溶液（4.2.1），振荡提取1h，转移至离心管（5.7），4000r/min离心5min，取10mL上清液过聚乙烯筛板（4.5.2），用氢氧化钠溶液（4.2.2）调节pH值至3.待净化.
7.2净化
HLB固相萃取柱（4.5.3）依次用5mL甲醇和5mL水活化，加人上述的待净化液，加人5mL淋洗液，舍弃流出液，抽干固相萃取柱，再加3mL洗脱液（4.2.4），收集洗脱液于10mL聚丙烯试管中，置于(4.5.1），供高效液相色谱测定.
注：全过程应避免接触玻璃器Ⅲ.
7.3测定
7.3.1仪器参考条件
a）色谱柱：Cs，250mm×4.6mm（内径），粒径5μm，或相当者； b）色谱柱湿度：40℃C；c)检测波长：252nm;d）进样体积：20μL；e)流动相：甲醇（4.1.2）和流动相A（4.2.5），流速及梯度洗脱程序见表1.
表1流动相及梯度洗脱程雪
min mL/esie 流速 规由 流动相A V0 1. 0 5 9510 13 1. 0 1. 0 5 90 10 9514 1. 0 90 1020 16 1. 0 1.0 5 5 95 95
7.3.2标准曲线的绘制
用草酸溶液（4.2.1）将标准工作液逐级稀释得到质量浓度分别为0.05mg/L、0.2mg/L、1mg/L、2mg/L和5mg/L的标准工作溶液，质量浓度由低至高依次进样测定，以峰面积和质量浓度计算，得到标准曲线回归方程.标准溶液色谱图参见附录A中的图A.1.
7.3.3测定
值应在标准曲线范围内超过线性范围则应稀释后再进样分析，外标法定量. 按照保留时间进行定性，样品与标准品保留时间的相对偏差不大于2%，待测样液中喹啉铜的响应
7.4空白试验
不加试样或仅加空白试样的空白试验应采用与试样测定完全相同的试剂、设备和步骤等进行.
8结果计算
试料中的喹啉铜含量以质量分数α计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1)计算.
(1)
式中：
A样品溶液中喹啉铜的峰面积；
A.-标准溶液中座啉铜的峰面积；p 标准溶液中喹啉铜的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V：一吸取出用于检测用的提取溶液的体积，单位为毫升（mL）； V. 提取溶剂总体积，单位为毫升（mL）；V样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；试料的质量，单位为克（g）.
计算结果保留两位有效数字，当结果大于1mg/kg时，保留3位有效数字.
9精密度
GB 23200.117--2019
9.1在重复性条件下，2次独立测定结果的绝对差不大于重复性限（r），重复性限（r）的数据为：
a）含量为0.1mg/kg时，重复性限（r）为0 0173；c)含量为2mg/kg时，重复性限（r）为0.3393； b）含量为1mg/kg时，重复性限（r）为0.1387；d）含量为4mg/kg时，重复性限（r）为0.6840.
9.2在再现性条件下，2次独立测定结果的绝对差不大于再现性限（R），再现性限（R）的数据为：
a)含量为0.1mg/kg时，再现性限（R）为0.0397；b)含量为1mg/kg时，再现性限（R）为0.4383；c)含量为2mg/kg时，再现性限（R）为0.6078； d)含量为4mg/kg时，再现性限（R）为1.7469.
10其他
本标准方法定量限为0.1mg/kg.
