中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准 动物性食品中5种α2-受体激动剂残留量 的测定液相色谱-串联质谱法
National food safety standard-
Determination of five kinds of alpha-agonists residues in animal
derived food by liquid chromatography- tandemmass spectrometry method
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
发布
前言
本标准系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中5种α-受体激动剂残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了动物性食品中5种a-受体激动剂的制样和液相色谱-串联质谱测定方法.尼定、安普乐定和可乐定残留量的测定.
本标准适用于猪肌肉、肝脏和肾脏组织及鸡肌肉和肝脏组织中替扎尼定、赛拉嗪、溴莫
2规范性引用文件
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中残留的a-受体激动剂，用碳酸钠缓冲溶液、乙酸乙酯提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量.
4试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙晴（CHCN）：色谱纯. 4.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯.4.1.3甲醇（CHOH）.4.1.4氨水（NHOH）.4.1.5无水碳酸钠（NaCO）.4.1.7乙酸乙酯（CHCOOCH）. 4.1.6碳酸氢钠（NaHCOs）.
4.2溶液配制
4.2.1碳酸钠溶液：取无水碳酸钠10.6g，用水溶解并稀释至100mL.4.2.2碳酸氢钠溶液：取碳酸氢钠8.4g，用水溶解并稀释至100mL. 4.2.3碳酸钠缓冲溶液：取碳酸钠溶液90mL、碳酸氢钠溶液10mL，混匀，现用现配.4.2.4甲酸溶液（0.2%）：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至500mL.4.2.5甲酸-乙溶液：取0.2%甲酸溶液80mL，加乙睛20mL，混匀.4.2.6氨水甲醇溶液（5%）：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀释至100mL.
4.3标准品
盐酸替扎尼定（Tizanidine hydrochloride CgHsCINsSHCI CAS:64461-82-1）、盐酸赛拉嗪（Xylazine Hydrochloride CHgNS CAS:7361-61-7）、溴莫尼定（Brimonidine CHgBrNs CAS:59803-98-4）、盐酸安普乐定（Apraclonidinehydrochloride CHNClHCl
GB31660.62019
CAS:73218-79-8）和盐酸可乐定（Clonidine hydrochloride CgHuClNs CAS:4205-91-8）：含量均≥98%.
4.4标准溶液制备
4.4.1标准贮备液：取盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、澳莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定
标准品各约10mg，精密称定，分别于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度均为1mg/mL的盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定标准贮备液.2~8℃保存，有效期6个月.4.4.2混合标准工作液：分别精密量取上述标准贮备液各1mL，于100mL量瓶中，用甲 醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10pg/mL的混合标准工作液.于2~8C保存，有效期1个月.度为0.5、1、10、50和100μg/L系列混合标准工作液，临用现配.
4.4.3标准曲线制备：分别精密量取混合标准工作液适量，用甲酸-乙溶液稀释配制成浓
4.5材料
4.5.2滤膜：有机相，0.22μzm. 4.5.1固相萃取MCX柱：60mg/3mL，或相当者.
5仅器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源.5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g.5.3均质机.5.4离心机.5.5涡旋振荡器.5.6旋转蒸发仪.5.7固相萃取装置.5.8鸡心瓶.5.9离心管：50mL.
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎并使均质.取均质的供试样品，作为供试试料.取均质的空白样品，作为空白试料.取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料.
6.2样品的保存
-20℃以下保存.
7 测定步骤
7.1提取
取试料2g（准确至土20mg），于50mL离心管中，加碳酸钠缓冲液5mL，振荡混匀，加乙酸乙酯10mL，充分振荡，于8000r/min离心5min，取上清液于鸡心瓶中，下层溶液中加乙酸乙酯10mL重复提取一次，合并两次上清液.于55C旋转蒸发至干，加甲酸-乙晴溶液4.0mL溶解残余物，备用.
7.2净化
MCX柱依次用甲醇、水各3mL活化.取备用液过柱，用水3mL、甲醇3mL分别淋洗，挤干，氨水甲醇溶液6mL洗脱，收集洗脱液，于60C旋转蒸发至干，用甲酸-乙腊溶液1.0mL溶解残余物，滤过，液相色谱-串联质谱测定.
7.3测定
7.3.1色谱条件
d）流速：0.3mL/min;e）流动相：A：乙：B：0.2%甲酸溶液，梯度洗脱程序见表1.
a）色谱柱：Cis（100mmx3.0mm，粒径1.8gm），或相当者：
b）柱温：30℃：
c）进样量：10gL:
表1梯度洗脱程序
时间 A：乙晴 B：0.2%甲酸溶液min % %0.0 10 903.0 4.0 30 70 704.5 80 205.5 08 205.6 10 90
7.3.2质谱条件
b）扫描方式：正离子扫描： a）离子源：电喷雾离子源：c）检测方式：多反应监测：d）离子源温度：150℃：
