中华人民共和国国家标准
GB 31658.28-2025
食品安全国家标准
动物性食品及尿液中乙酰孕激素类药物 残留量的测定液相色谱-串联质谱法
National food safety standardDetermination of acetylgestagens drugs residues in animal derivedfood and animal urine by liquid chromatography-tandem massspectrometry method
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会发布国家市场监督管理总局
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
食品安全国家标准 液相色谱-串联质谱法
动物性食品及尿液中乙酰孕激素类药物残留量的测定
1范围
本文件规定了动物性食品及尿液中乙酰孕激素类药物残留量检测的制样和液相色谱-申联质谱方法.本文件适用于猪、牛、羊、鸡的肌肉、脂肪、肝、肾脏组织，以及牛奶、羊奶、乳粉（牛、羊）、鸡蛋、猪尿、牛尿中醋酸氯孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸经孕酮残留量的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶水解后，残留的乙酰孕激素用乙晴提取，增强型除脂固相萃取柱净化.液相色谱-串联质谱测定，基质匹配外标法定量.
5试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯. 5.1.2乙晴（CHCN)：色谱纯.5.1.3甲酸（HCOOH）；色谱纯.5.1.4乙酸铵（CHCOONH）：色谐纯，5.1.5萃取盐包：含4gNa;SO、1gNaC1.5.1. 6β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶(β-Glucuronidase/aryl sulfatase).10 000 U/mL.
5.2.160%乙晴溶液：取乙睛600mL.用水稀释至1000ml.5.2.30.2mol/L.乙酸铵缓冲液：取2mol/L乙酸铵溶液10mL，用水稀释至100mL.用适量乙酸调pH 5.2.22mol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵15.4g，用水溶解并定容至100mL.用适量乙酸调pH至5.2.至5.2.5.2.42mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）：取甲酸1mL、2mol/L乙酸铵溶液1mL.用水稀释至1 000 ml.5.2.50.1%甲酸乙晴溶液：取甲酸1ml.用乙晴稀释至1000ml.
5.3标准品
醋酸氟孕酮（Flurogestone acetate，FGA）、醋酸甲地孕酮（Megestrolacetate，MA）、醋酸美仑孕酮
(Melengestrol acetate MGA）醋酸氯地孕酮（Chlormadinone acetate CMA）、醋酸羟孕酮(Hydroxypro-gesterone acetate，HPA）、醋酸甲羟孕酮（Medroxyprogesterone acetate MPA）含量≥99%.化合物信息见附录A.
5.4标准溶液制备
5.4.1标准储备液：取乙酰孕激素标准品各10mg.精确至0.1mg.加甲醇使溶解并定容至10mL.配制成浓度均为1mg/mL的标准储备液.一18C以下保存，有效期3个月.5.4.3混合标准工作液：取适量中间浓度混合标准溶液于10mL容量瓶中.用甲醇稀释至刻度，摇匀，配制 中间浓度标准溶液.4℃~8℃保存，有效期1周.
度，摇匀，配制成浓度为50μg/mL的中间浓度混合标准溶液.醋酸甲羟孕酮单独配制浓度为50pg/mL的
成浓度为1pg/mL的标准工作液.醋酸甲羟孕酮单独配制浓度为1μg/mL的标准工作液.现用现配.
5.5.1增强型脂肪去除固相萃取柱或性能相当者.5.5.2滤膜：有机系，0.2um
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI).6.2天平：感量0.01g.6.3分析天平：感量0.00001g.6.4均质机.6.5涡旋混合器. 6.6振荡器6.7冷冻离心机：10000r/min或以上.6.8氮吹仪.6.9超声仪.6.10pH计.
7试样的制备与保存
7.1试样的制备
取适量新鲜或解冻的空自或供试组织，绞碎并使均质.取适量新鲜或解冻的空白或供试牛羊奶样品，均质或混合均匀.奶粉按1：5重量比还原成液态奶进行测定.取适量新鲜或冷藏的空白或供试鸡蛋，去壳后混合均匀，尿液样品取样后应在一18℃以下保存.试验前取适量恢复至室温，混匀备用.
b）取均质的空白样品，作为空白试样； a）取均质的供试样品，作为供试试样；c）取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样.
7.2试样的保存
-18℃以下保存.
8测定步骤
8.1酶解与提取
取组织和鸡蛋样品（5±0.05）g，加人0.2mol/L乙酸铵缓冲溶液（pH=5.2）3mL.取奶样（5±0.05）g，奶粉样品（1±0.01）g（按7.1还原为液态奶），加人2mol/1乙酸铵溶液（pH=5.2）0.5mL.取尿液5mL（士0.05 mL) 加人2mol/L乙酸铵缓冲溶液（pH=5.2）0.5 mL 充分混匀.再加人β-葡萄糖
