中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 1197-2003
Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified ponents in rapeseeds
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标座的附录A老资料性附录.本标座由国家认证认可能警管理委员会提出并扫口， 本标座起草单位：中华人民共和国上海出人境检检检疫局.本标库主要起草人，播类文，此高飞、那家华，新永强， 本标准系首次发有的检验检统行业标座，
油菜籽中转基因成分定性PCR 检测方法
1竞围
本标准规定丁批草甘膜除草剂.抗享丁票除别、维性不育转基国润菜籽的定性PCR检测方法，
本标准适用于批草甘颁分草剂.抗享丁鳞除享到、地性不首袋基我第的定性PCR检通
2药性引用文件
下列文件中的录款道过本标准的引用面或为本标准的条款，凡是注明目期的引用文件，其随后新交是否可使用这查文件的最新本.凡是不注目期的引用文件、其单新版本温用于本标准. 有的修改单（不包格勤装的内容）成参订版均不法用于本标准然后，能梁服基事标理选或势试的各方
GB/T682分W实营空用水建用和实验方续 SN/T1193基国检测实检室提术要求SN/T1194桂物及其产品中转基因成分检物输样和新排方法 SN/T1204根物及其加工产品中转盈调成分实时荧允PCR定性检验方法
3水语、定文和维碍路
下列水活.定文和难略进适用于本标准.
3. 1
s
将物科本身不其有的，来源于其他物种的功能DNA序列，通过备种导人子级，使其在装物种中选行表达，以便该物种嵌特新的品种特证.
3.2
聚合隔链式拟应peymerase chainreection.PCR
计的两条列物分别与腻板DNA丙条情上相泉的一R工补序列发生通火百相互结合-候着在DNA聚合 根板基器序列光经高温变性成为单情在DNA聚合静作用和运宜的反应条件下.数据膜板序列设脂的作用下以四种航氧核糖航配（心NTP）为底物，使引物得以延伴，然后不断重复变性、退大和延神这 一键环，使模扩增的基因片设以儿管数护造，
3.3座尾者
3.3. 1 PCR;polymerase chain reartion R称 PCR 3.3 2DNA，deoxyribonecleie acid.级氧核胞核股 3. 3. 3 dNTP deoxyribonucleoxide triphosghate-鼠鼠核苷股三腺服 3. 3. 44ATP deoayadenosine triphosa-服K B管二确据 3. 3.5 dCTP deoxycytidine triphcaphate.最氧的量三确能 3. 3.6dGTP：deoayguanosine triphosphme.长氧央三确股 3.3. 74TTP:deoxythymidine triphosphene.版氧期t三确报 3.3.8dUTP;deoxyuridite triphosphate.股氧聚世三成航
3.3 9UDGurari DNA elyeoxylae 尿电e DNA帮基脂 3.3. 10bp：base pair 碱基对 3. 3. 11 EDTA;ethylene daminesetraacetit acid.乙二胶F乙R 3. 3. 12 Tag.Tog DNA Polymtrs.附B DNA R分M 3. 3. 13 TE Tris-HCI EDTA 缓冲液.3. 3. 14SD5sodicm dodecylsellete，十二候基磺最情 3. 3. 15Tris:tris (hydroxymethyl) aminomethane-三(胚甲基>氨基甲姚.3. 3.16PEP：phophoenopyruse carboxyse me，确脂地醇式丙国酸股化酯 3. 3. 17 FIV 3SS 35S promoter Irom a modified figwort mossic virus(ceulimovires group) 花3. 1. 18 C74 EPSPS 1-emolpyrurylahlkimate-3-phosphate synthaoe grmr 5-事 章般-3-鼠股 合 i指 叶素毒355自动于.3. 3. 19CTP chloroplast twnsit peptide gese D细体运输数签因. 基因.3. 3. 21 E9 3' 3’ soquenee of small subunsit of rbcS(ribulose-1 :5-bisphosphane carboaylast) E gee 3.3. 20G0X:glphosate exidoreductase gene 苹甘膜氧化还原酯基因.（fnompea）.米源于激豆的教期糖-1.5二确整院化属E9基因小亚基3确序列.3.3.22CaMV 3SS 35S promoter from ewuliflower moxsir virus 飞那幕花叶病毒 35S 自劲于 3. 3. 23 PAT ; pheaphinotuicin aostyltranaferase grne Irom Bacilier aewyleliqur fecieu 8 于 #FB3 1. 24BARNASE riboeurlese gee fom Beoifhs emyfoligfaciees 泉 B F 杆 Bacils Berrliax amyloliqutfaciens 草T情乙能F移解基网 omyiofiqerfacieu W ribotuclease 基因 3. 3. 25 BARSTAR:specific inhibinor of the bernase gene from Barifur amylofiparfaclexs-&8 于HF Seri/lar m ylelijuefecims 的 bemase &因的排排3制&区 3. 3. 27NOS; promoter ol sopalinr syathae gene (rom Agrabucterism lamr fecirms 米B于8杆 B) 显指城合或辨基四追动子.3.3. 28NOS 3' termineter of eopaline aymthase gene B指城合成期基世将上子 3.3. 29OCS 3octopine symthase gene teminator.意鱼碳合成腾盈四终止子.3.3. 30 SsuAra mhulose-1 5-bisphosphate carbosylase small subunit atslA promoter frem Arahf- depni Aelians，东国于拉用否的 ribulose-15二确数度化期小亚基atsA基因的电要子 3.3. 31 TA29; developmentally regulated promooer from anther-specific TA29 gese from Nicoriens lc，来源于级草的花震持异性TA29基因的发育调节应动子.3.3. 32 TR7 3′s3’ regulatory regisn from Agroberieriam hunr faciemr of the T-DNA transcript 7 8强干衣杆类的T-DNA转扇子7的3调节区城，
4防污染3
检测过程中防止交叉药染的脂施校频5%/T1193中的规定执行.
5抽样和制样
5.1抽择
技期S%/T 1194中观宅的方执行.
称取性20 g 推案杆样晶经干热灭前（150C干路孩处理2h)或 120℃、30 min 真压消毒处湿的通
体成粉碎抗中骤墨至样品粉末聊轻时0.5mm大小.
6测定方法
6.1原理
种品经过提取DNA后.针对特基固植物所人的外源基医的基因序列设计引物，通过PCR投术，特异性扩增外源基国的DNA片斯，板据PCR扩增继果，判断该样品中基否含有转基固成分.
6.2试到和材料
除另有规定务.其他试别为分新纯成生化试列，水为检账GB/T6482规定的一级水.
6.2. 11 mol/L Tris-HCI暖冲减（pH &.0)，排取 121. 1 g-Tris.指于 800 mL 水中.提排.人浓盐酸42ml.冷母至室盈，用降盐酸准确调整pH至&.0.分装后高压灭图备用.
6.2. 2 0.S mol/L EDTACpH8. 0) 在 809 mL 水中排人 186. 1 g Na -EDTA • 2H O 在避力提排B剔 视拌，用氢氧化销调节溶度pH值至&.0（约省20氢氧化钠颗粒），然后定容至1L.分装后商压天备用，
6. 2. 3 DNA 抽提缓液 量取 300 mL 1mol/L Tris-Cl.50 mL 0. 5 mol/L EDTA 称取 5.0 g SDS 15.348黑化销定容至1L.分装后高压灭菌备用
6.2. 9 TE 级 *度(pH8. 0) 量 取 10 mL 1 mol/L Tris-CI(pHs.0) 和 2 mL 0.5 mol/L EDTA(μH 8.0），加水定容至1000mL-分装后高压天备用.
6.2. 1010×PCR很冲液
含 500 mmol/L 氮化钾 -100 mmol/L Tris-HC)(pH 8. 3) 15 mmol/L 贵允核(MgCl ) 0. 1%明度 6.2. 1110 ×氧化胰:25 emol/L 6.2. 12 10× dNTP; 含 2. 5 mmol/L dATP dUTP.dCTP dGTP 6. 2. 13Taq W S Unit/saL 6.2.14引物，根表1的序列进行合成引物加超纯水配制成100μmol/L储存，直接用于PCR测试的引物陈度为5mol/1.
1检测转基因油菜肝内外源基固所的引物序列
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