标
准
乳及乳制品中维生素K和K2含量的测定 高效液相色谱法
Determination of Vitamin K and K in Milk and Dairy ProductsHighPerformance Liquid Chromatography
目次
前 言1范围..2规范性引用文件3术语和定义4方法原理，5试剂和材料.6仪器与设备.7测定分析...8分析结果的表述9精密度，10检出限及定量限附录A
前言
起草. 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由上海市检验检测认证协会提出并归口.
本文件由上海市检验检测认证协会发布.
本文件起草单位：内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司、上海市质量监督检验技术研究院、青岛海关技术中心、微谱北方检测认证（山东）有限公司、内蒙古欧世蒙牛乳制品有限责任公司、上海微谱 检测认证有限公司、内蒙古特康瑞营养食品有限责任公司、现代牧业（集团）有限公司.
本文件主要起草人：通刚、潘思奕、赵玉然、董立雅、李秋琴、唐亚娟、黄文强、张琳、吴腾、毕春波、李俊楠、李昊哲、闫良、梁凤玲、马利军、刘一峰、李雪晶、刘天益、高雪梅、王美华.
首次承诺执行单位：内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司、上海市质量监督检验技术研究院、青岛海关技术中心，微谱北方检测认证（山东）有限公司、内蒙古欧世蒙牛乳制品有限责任公司、上海微谱检测认证有限公司、内蒙古特康瑞营养食品有限责任公司、现代牧业（集团）有限公司.
乳及乳制品中维生素K和K含量的测定
高效液相色谱法
1范围
本文件规定了乳及乳制品中维生素K和K含量的测定方法.
本文件适用于乳及乳制品中发酵乳、调制乳、乳粉、干酪、炼乳等维生素K及维生素K三种分型即四烯甲萘醒、七烯甲萘醒、九烯甲萘醒含量的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4方法原理
样品经脂肪酶或淀粉酶酶解，采用正已烷提取试样中的维生素K和K三种分型，提取液浓缩后经反相液相色谱分离，锌还原柱柱后还原，荧光检测器检测，外标法定量.
5试剂和材料
除另有规定外，均使用分析纯试剂.
5.1试剂
本方法所用水为GB/T6682规定的一级水.
5.1.1甲醇：色谱纯.5.1.2异丙醇：色谱纯.5.1.3无水乙醇.5.1.4无水碳酸钾.5.1.5磷酸二氢钾.5.1.6正已烷：色谱纯.
5.1.7四氢呋喃：色谱纯.5.1.8冰乙酸.5.1.9氯化锌.5.1.10无水乙酸钠.5.1.10氢氧化钠.5.1.12 脂肪酶（CAS 号：9001-62-1)：酶活力≥700 U/mg.5.1.13 淀粉酶（CAS号：9000-92-4)：酶活力≥1.5U/mg.
5.2试剂配制
5.2.1甲醇异丙醇溶液（11）：量取50mL甲醇与50mL异丙醇混合，摇匀.5.2.2氢氧化钠溶液（40%）：称取40.0g氢氧化钠，用水溶解，冷却，稀释至100ml.5.2.3磷酸盐缓冲液（pH8.0）：溶解54.0g磷酸二氢钾于300mL水中，用40%氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加水至500mL.5.2.4流动相：量取甲醇900mlL，四氢映响100mlL，冰乙酸0.3mL，混匀后，加入氯化锌1.5g，无水乙酸钠0.5g，超声溶解，0.2um滤膜过滤.
5.3标准品
5.3.1维生素K：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，CAS号：84-80-0.5.3.2维生素K（四烯甲萘醒，MK-4）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，CAS号：863-61-6.5.3.3维生素K（七烯甲萘醒，MK-7）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，CAS号：2124-574.5.3.4维生素K（九烯甲萘醒，MK-9）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，CAS号：523-39-7.
5.4标准溶液配制
5.4.1维生素K标准储备液（400ug/mL）：准确称取维生素K标准品适量（精确至0.1mg）于小烧杯中，用甲醇溶解定容至10mlL容量瓶中，储备液在-20C以下避光条件下保存，保存期2个月.5.4.2MK-4标准储备液（400ug/mL）：准确称取MK-4标准品适量（精确至0.1mg）于小烧杯中，用甲5.4.3MK-7标准储备液（400μg/mL）：准确称取MK-7标准品适量（精确至0.1mg）于小烧杯中，用甲 醇溶解定容至10mL容量瓶中，储备液在-20C以下避光条件下保存，保存期6个月.醇异丙醇溶液（11）定容至10mL容量瓶中，超声10min，储备液在-20℃以下避光条件下保存，保存5.4.4MK-9标准储备液（400ug/mL）：准确称取MK-9标准品适量（精确至0.1mg）于小烧杯中，用甲 期6个月.醇异丙醇溶液（11）定容至10mL容量瓶中，超声10min，储备液在-20℃以下避光条件下保存，保存
