中华人民共和国国家标准
GB 5009.310-2026
食品安全国家标准
食品中交链孢毒素的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准
食品中交链孢毒素的测定
1范围
本标准规定了食品中细交链孢菌酮酸（TeA）、交链孢酚（AOH）、交链孢酚单甲醚（AME）和腾毒素（TEN）的液相色谱-质谐/质谱测定方法.
本标准适用于食品中TeA、AOH、AME和TEN的测定.
2原理
试样加人同位素内标后，经磷酸二氢钠溶液、乙晴-甲醇-磷酸二氢钠溶液或乙晴-磷酸二氢钠溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪检测，同位素内标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1乙晴（CHCN).3.1.2乙睛（CHCN）：色谱纯.3.1.3甲醇（CHOH）3.1.4甲酸（HCOOH）.3.1.5磷酸二氢钠（NaHPO）：纯度≥99%. 3.1.6碳酸氢铵（NHHCO）：纯度≥99%.
3.2试剂配制
3.2.1磷酸二氢钠溶液（0.05mol/L，pH3.0）：称取6.0g无水磷酸二氢钠，溶解于950mL水中，用甲酸调节pH3.0，用水定容至1000mL，混合均匀.二氢钠溶液，混合均匀.3.2.3乙晴-磷酸二氢钠溶液（5545）：分别量取550ml.乙晴和450mL磷酸二氢钠溶液，混合均匀.3.2.4甲醇-水（2080)：分别量取20mL甲醇和80mL水，混合均匀. 3.2.51mmoL碳酸氢铵水溶液：称取79.06mg碳酸氢铵，溶解于950mL超纯水中.用超纯水定容至1 000mL 混合均匀.
3.3标准品
3.3.1TeA标准品（CHNO，CAS号：610-88-8）：纯度≥99%的标准品或其溶液.
3.3.2AOH标准品（CHOCAS号：641-38-3）：纯度≥99%的标准品或其溶液.
3.3.3AME标准品（CHO，CAS号：26894-49-5）：纯度≥98%的标准品或其溶液.3.3.4TEN标准品（CHN O，CAS:28540-82-1)：纯度≥98%的标准品或其溶液.3.3.5C-TeA同位素内标（CH：NO）：浓度为25μg/mL的标准溶液，或纯度≥98%的标准品.3.3.6C，-AOH同位素内标（C，HO）浓度为10μg/mL的标准溶液，或纯度≥98%的标准品.3.3.71C-AME同位素内标（C；H；O）浓度为10μg/mL的标准溶液，或纯度≥98%的标准品. 3.3.8C-TEN同位素内标（CHNO）：浓度为5pg/mL的标准溶液，或纯度≥98%的标准品.
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液（10Oμg/mL)：分别准确称取TeA、AOH、AME和TEN各10mg（精确至0.01mg），用甲醇溶解并定容至不同100mL容量瓶中，混匀.一18C及以下温度密封避光保存，有效 期12个月，
3.4.2标准中间液（20pg/mL）：准确吸取AME和TEN标准储备液各2.0mL分别至不同的10ml容量瓶中，用甲醇定容.一18℃及以下温度密封避光保存，有效期3个月.
3.4.3混合标准中间液（TeA 10 μg/mL，AOH 10 μg/mL，AME 2.0 μg/mL和 TEN 2.0 μg/mL）：准确 吸取TeA和AOH标准储备液、AME和TEN标准中间液各1.0mL至同一10mL容量瓶中，用甲醇定容.一18C及以下温度密封避光保存，有效期3个月.
3.4.4混合标准工作液(TeA 1.0μg/mLAOH 1.0 μg/mL AME 0.2μg/mL 和 TENO.2μg/mL):准确吸取混合标准中间液1.0mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容.一18℃及以下温度密封避光保存，有效期3个月.
3.4.5同位素内标中间液（C-TeA 2.5μg/mL C-AOH 2.5pg/mL，Cs-AME 0.5pg/mL和C-TEN0.5μg/mL）：准确吸取C-TeA(25μg/mL）同位素内标 1.0mL、C-AOH （10μg/mL)同位素内标2.5mL、C-AME（10pg/mL）同位素内标0.5mL和Cz-TEN（5.0μg/mL）同位素内标1.0mL.至同一10mL容量瓶中，用甲醇定容.一18C及以下温度密封避光保存，有效期3个月.
3.4.6混合同位素内标工作液（C-TeA0.50μg/mL，C-AOH0.50μg/mL，Ci-AME 0.10μg/mL和C-TEN0.10pg/mL）：准确吸取同位素内标中间液2mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容.一18℃及以下温度密封避光保存，有效期3个月.
3.5混合标准系列工作溶液
分别准确吸取混合标准工作液和混合同位素内标工作液，用甲醇-水（2080）配制混合标准系列工作溶液.其中 TeA和AOH 浓度分别为1.00ng/mL、2.00ng/mL、5 00ng/mL、20.0ng/mL、50.0 ng/mL;AME和 TEN 浓度分别为 0. 200 ng/mL、0. 400 ng/mI、 1. 00 ng/mL、 4. 00 ng/mL10.0ng/mL；每个浓度点中²C-TeA，C-AOH，Cs-AME 和C-TEN的浓度分别为20.0 ng/mL 20 0 ng/mL 4.00 ng/mL 和 4.00 ng/mL 临用现配.
3.6材料
3.6.1固相萃取柱：亲水亲脂平衡型固相萃取柱（200mg/6mL），填料为N-乙烯基吡咯烷酮-二乙基苯聚合物，或相当者.
3.6.2微孔滤膜：聚四氟乙烯滤膜（PTFE滤膜），0.2μm.
4仪器和设备
4.1液相色谱-质谱/质谱仅：配电喷雾离子源. 4.2高速粉碎机.2
4.3组织摘碎机.4.4匀浆机.4.5涡旋振荡器：转速500r/min~2500r/min.4.6超声波清洗器：功率≥500W.4.7天平：感量为0.01g和0.01 mg 4.8离心机：最高转速≥4000r/min.4.9高速冷冻离心机；最高转速≥12000r/min.4.10固相萃取装置（带真空泵）.4.11氮吹仪.4.12pH计：精度为0.01.
5分析步骤
5.1试样制备与保存
5.1.1试样制备
检测用的样品量应大于1kg：当样品量不足1kg时至少取同一批次的3个包装.其中.固体样品用高速粉碎机粉碎，半固体样品用组织接碎机捣碎，液体样品用匀浆机匀浆.
注1：对于高油脂含量颗粒样品、柔韧性样品、高黏度样品，高糖样品等特殊样品可以采取冷冻措施进行制样.注2：对于碳酸饮料或酒类等，可采取超声、搅拌或抽真空等措施脱气后混匀.注3：根据检验目的可按实际情况取样制备.
5.1.2试样保存
制备后混合均匀的试样均分至约100g的多个包装储存于洁净的容器内，密封后根据试样性质置于2℃~6℃或-18℃及以下避光保存.
5.2试样提取
5.2.1固体和半固体试样
和干辣椒试样中加入50uL混合同位素内标工作液），报荡混匀后静置30min.水分含量较低的固体 称取5g试样（精确至0.01g）于50mL刻度离心管中，加人200pL混合同位素内标工作液（大豆和半固体试样先加入7mL水使试样充分溶账或分散，其他固体和半固体试样直接加人10mL乙-甲醇-磷酸二氢钠溶液，涡旋振荡15min，4°C下8000r/min离心10min，吸取上清液，剩余残渣再加人10mL上述提取液重复提取一次.合并上清液并用上述提取液稀释至25mL备用.
5.2.2液体试样
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL刻度离心管中，加人200μL混合同位素内标工作液，振荡混匀后静置30min，加入25mL乙晴-磷酸二氢钠溶液（植物油）或加人磷酸二氢钠溶液定容至25mL（其他液体试样）涡旋振荡15min4C下8000r/min离心10min，取上清液备用.
注：若基质提取过程中不易分散，可加人陶瓷均质子促进样品基质分散以充分提取待测物.
5.3净化
准确吸取5.0mL上述上清液（大豆和干辣椒试样吸取10.0mL），加人20mL磷酸二氢钠溶液，混合均匀后在8000r/min下离心5min，取稀释后的上清液待净化.
固相萃取柱使用5mL甲醇和5mL水依次活化，将稀释后的上清液转移至活化好的固相萃取柱中，控制样液以每秒1滴～2滴的速度稳定下滴.上样完毕后，加人5mL水淋洗，待淋洗结束后，用真空泵抽干固相萃取柱，在萃取柱下放置15mL刻度试管，依次加人5mL甲醇和5mL乙晴洗脱，控制流速为每秒1滴~2滴，收集洗脱液.在40℃C下用氮气缓缓吹至近干，加人1mL（大豆和干辣椒试样PTFE滤膜后，收集于进样瓶中，待测. 加人0.5mL）甲醇-水溶液（2080），涡旋30 s，冰浴超声5min，于4℃C下12 000r/min离心10 min，过
5.4仪器参考条件
5.4.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
b）进样量：10pL: a）色谱柱：C柱（柱长100mm，柱内径2.1mm，粒径1.7pm），或等效柱；c）柱温：40℃；d）流动相：A：1mmoL碳酸氢铵水溶液，B：色谱纯乙晴；e）流动相梯度洗脱程序见表1.
表1梯度洗脱程序
时间 流建 流动相A 流动相Bmin ml/min % %0 0 3 95 51 0 3 95 53 0 3 24 766 0 3 10 908 5 0 3 10 908 6 0.3 95 511 5 0.3 95 5
5.4.2质谱参考条件
a）离子化模式：电喷雾电离正/负离子模式（ESI/ESI）；b）多反应监测（MRM），监测离子参数见表2：e）气帘气：35 psi；d）碰撞气：40L/h; e）离子化电压：5000V/-4500V；f）离子源温度：500℃；g）喷雾气：40psi:h）辅助加热气：60 psi.
