NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4820-2025
Diagnostic techniques for porcine deltacoronavirus disease
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.
本文件由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）提出并归口.
本文件起草单位：河南农业大学、中国动物卫生与流行病学中心、华中农业大学，
玉强、靳晓慧、郭东辉. 本文件主要起草人：胡慧、魏战勇、邵卫星、方六荣、郑兰兰、张红垒、张峰、夏璐、张越、祖少坡、袁晋、项
引言
猪丁型冠状病毒感染（porcine deltacoronavirus disesse）是由猪丁型冠状病毒（porcine deltacoronavirus，PDCoV）引起的猪的一种高度接触性肠道传染病，临床上以10日龄内的仔猪发生腹泻、呕吐、脱水为主要 特征.在仔猪腹泻样品中，PDCoV检出率高达20%～60%.该病一年四季均可发生，其中冬春季为高发季节.病猪、带毒猪和隐性感染猪是本病的主要传染源.病毒主要通过粪-口途径进行传播.
PDCoV属于套式病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属成员.
猪丁型冠状病毒感染诊断技术
1范围
本文件规定了猪丁型冠状病毒感染的临床诊断、样品采集与处理，以及病毒分离与鉴定、间接免疫荧光试验（IFA）、TagMan荧光定量RT-gPCR、酶联免疫吸附试验（ELISA）等实验室诊断方法的技术要求.
本文件适用于新生仔猪的猪丁型冠状病毒感染的诊断、检测、检疫、监测和流行病学调查.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本
GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB19489实验室生物安全通用要求NY/T541-2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4缩略语
下列缩略语适用于本文件.BSA:牛血清白蛋白(bovine serum albumin)bp:碱基对(base pair) CPE：致细胞病变效应（cytopathic effect）Cr值：循环阔值（cycle threshold)cDNA：互补脱氧核糖核酸（plementary deoxyribonucleic acid)DEPC：焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate)DMEM：杜氏培养基(dulbeccos modified eagle medium) DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）ELISA：酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay）FITC：异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate）IFA：间接免疫荧光（indireet immunofluorescence assay）LLC-PK1细胞：猪肾细胞(porcine kidney epithelial cells 1 LLC-PK1) IgG：免疫球蛋白 G(immunoglobulin G)MEM：最低必需培养液（minimal essential medium)OD：光密度（optical density）PBST：含吐温-20 的磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline with tween-20) PBS：磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline)PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction)PDCoV：猪丁型冠状病毒（porcine deltacoronavirus）RNA：核糖核酸（ribonucleic acid)RT-qPCR：反转录-实时荧光定量 PCR(reverse transcription quantitative polymerase chain reaetion)
NY/T 4820-2025
5临床诊断
5.1易感动物
家猪是PDCoV的易感动物，各年龄段猪均可感染，主要危害10日龄以内的新生仔猪.
5.2临床症状
发病仔猪以腹泻、呕吐、脱水为特征.粪便为黄色、灰黄色稀粪，严重可呈水样腹泻；呕吐物多为白色未消化的凝乳状液体；发病仔猪精神菱摩不振、倦怠、畏寒；全身被毛杂乱、无光泽；食欲减退，病程后期严重脱水，体重下降明显.
5.3病理变化
5.3.1剖检病理变化：感染仔猪胃内充满未消化的凝乳块：十二指肠、空肠和回肠肠壁变薄，部分肠管扩张呈半透明状，充满大量黄色的液体：肠系膜充血严重.5.3.2组织病理学变化：十二指肠腺体减少，黏膜下层及肠壁变薄；空肠损伤最严重，肠绒毛大量脱落，黏度与隐窝深度之比有不同程度的降低.
膜下层增厚：回肠肠绒毛变短、萎缩、脱落，杯状细胞减少，淋巴滤泡体积减小、数量减少；不同肠段绒毛高
5.4临床判定
5.4.1新生仔猪出现5.2的临床症状或5.3的病理变化.可临床判定为PDCoV感染疑似病例.5.4.2进一步确诊应采集腹泻仔猪的血清、粪便、小肠组织及内容物等样品.如有可能，应同时采集同一流行病学单元内其他未见明显临床症状仔猪的血清、粪便、小肠组织及内容物进行实验室诊断.
6样品的采集与处理
6.1采样用具
6.1.1器械：解剖刀、剪刀、镊子、药匙、注射器及针头、组织匀浆器等.6.1.2容器：离心管、样品保存管等.6.1.3个人防护用具：防护服、防护镜、防护帽、防护靴、口罩、一次性手套等.6.1.4其他：微孔滤器、采样单、记号笔、防水标签、封口膜、冰袋等.6.2试剂材料6.2.1 DMEM.6.2.2青霉素，浓度为10000IU/ml.6.2.3链霉素，浓度为10000μg/mL.6.3.1组织样品：用无菌剪刀剪取发病仔猪的小肠组织0.5g~1.0g组织作为待检样品，放置于离 6.3样品采集心管.6.3.2粪便及肠内容物样品：用无菌的药匙，刮取新鲜粪便及肠内容物，放置于离心管.6.3.3血液样品：用无菌注射器采集发病猪或感染猪血液.
6.4.1组织样品：采集的肠组织（经剪碎处理），按1：5的比例加入终浓度为100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素的DMEM细胞培养液，反复研磨至状，将研磨好的病料反复冻融3次，4“C3000r/min 离心20min，上清液用0.22um微孔滤器过滤，收集样品滤液.6.4.2粪便及肠内容物样品：采集的粪便或肠内容物，按1：5的比例加人终浓度为100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素的 DMEM细胞培养液，振荡混匀，4C3 000r/min离心20min，上清液用0.22 μm微孔滤器过滤，收集样品滤液.2
