中华人民共和国国家标准
GB 5009.183-2025
食品安全国家标准 食品中脲酶的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB5413.31-2013《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脲酶的测定》、GB/T5009.183-2003《植物蛋白饮料中脲酶的定性测定》、GB/T5009.186-2003《乳酸菌饮料中脲酶的定性测定》、GB/T30885-2014《植物蛋白饮料豆奶和豆奶饮料3附录A和GB20371-2016《食品 安全国家标准食品加工用植物蛋白》附录A检测标准.
与GB5413.31-2013相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中脲酶的测定”：修改标准适用范围：修改纳氏试剂显色法为第一法； 增加了滴定法为标准第二法.
食品安全国家标准 食品中脲酶的测定
1范围
本标准规定了食品中薪酶活性的测定方法.
第一法纳氏试剂显色法适用于含大豆成分的饮料、婴幼儿配方食品、娄幼儿辅助食品、乳制品、特殊医学用途配方食品、大豆蛋白肽及豆制品中脲酶活性的定性测定.
第二法滴定法适用于大豆蛋白、豆粉与豆奶粉中脲酶活性的定量测定.
第一法纳氏试剂显色法
2原理
脲酶在pH7.0、40C条件下，催化尿素转化成碳酸铵，碳酸铵在碱性条件下生成氢氧化铵，再与纳氏试剂中的碘化钾汞复盐作用生成棕色的碘化双汞铵，根据显色情况定性判断样品中腺酶活性.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水.
3.1试剂
3.1.1尿素（HNCONH）.3.1.2二水合钨酸钠（NaWO 2HO）.3.1.4硫酸（HSO）. 3.1.3四水合酒石酸钾钠（CHOKNa4HO）.3.1.5磷酸氢二钠（NaHPO）.3.1.6磷酸二氢钾（KHPO）.3.1.7红色碘化汞（Hgl）.3.1.8碘化钾（K1）.3.1.9氢氧化钠（NaOH）.3.1.10石墨化炭黑（GCB）固相萃取柱：300mg，6mL.
3.2试剂配制
3.2.1尿素溶液（10g/L）：称取尿素5g（精确至0.01g），用水溶解并稀释至500mL，混匀，保存于棕色试剂瓶中，置于2℃～8℃冰箱中避光保存，有效期2周.3.2.2钨酸钠溶液（89.0g/L）：称取二水合钨酸钠50.0g，用水溶解并稀释至500mL，混匀.3.2.3酒石酸钾钠溶液（14.9g/L）：称取四水合酒石酸钾钠10.0g，用水溶解并稀释至500mL，混匀.
GB 5009.183-2025
3.2.5缓冲溶液（pH7.0）：称取磷酸氢二钠5.79g，用200mL水溶解，另称取磷酸二氢钾3.53g，用 3.2.4硫酸溶液（595）：量取25mL硫酸，搅拌条件下，缓缓加人475mL水中，冷却后混匀.200mL水溶解后，移入上述溶液中，用水稀释至1000mL，混匀.3.2.6纳氏试剂：称取氢氧化钠14.4g用50m1.水充分溶解并冷却.称取红色碘化汞5.5g.碘化钾4.125g，溶于25mL水中，然后分次、少量缓缓移至上述氢氧化钠溶液中，加人过程中需不断摇匀.转移完毕后，加水稀释至100mL，混匀，转入棕色试剂瓶内，静置后，取上清液使用.于2℃～8C冰箱中保存，有效期为1个月.或使用满足要求的商品化纳氏试剂溶液.
4仪器和设备
4.1电子天平：感量分别为0.01g和0.001g. 4.2涡旋振荡器.4.3恒温水浴锅：可控温至40℃士1℃4.4具塞比色管：25mL.
5分析步骤
5.1试样制备
液态样品摇匀，固态样品粉碎均匀，半固态样品搅拌均匀.
5.2试样分析
试样，分别置于甲、乙两支25mL比色管中，加人1mL水，振摇30s，然后分别加人1mL缓冲溶液.向甲管（样品管）加入1mL尿素溶液，再向乙管（样品空白对照管）加人1mL水，摇匀后，置于40℃士1C水浴中保温20min.从水浴中取出两管，各加人4mL水，摇匀，再加人1mL钨酸钠溶液，摇匀，加 入1mL硫酸溶液，摇匀，中速定性滤纸过滤，收集滤液备用.取上述滤液2mL，分别加人至两支25mL具塞比色管中，各加人15mL水，1mL酒石酸钾钠溶液和2mL纳氏试剂，用水定容至25mL，摇匀.5min内观察结果.
固体样品：各称取0.10g（精确至0.001g）试样，分别置于甲、乙两支25mL比色管中，加人1mL水，振摇30s，然后按上述相同操作进行.
注1：固形物/干物质按照附录A测定.
注2：若样品溶液有颜色在加人碗酸溶液播匀后取6mL落液直接通过石墨化碳黑固相萃取柱净化弃去前2mL.流出液，收集中间段流出液2ml.然后进行量色操作.
6分析结果的表述
分析结果按表1进行判断.
表1分析结果的判断
豚酶活性 表示符号 显色情况强阳性 样品管比空白对照管颜色深，且量示砖红色浑液或澄清液次强阳性 样品管比空白对照管颜色深，且量示桔红色澄清液阳性 样品管比空白对照管颜色深，且量示深金黄色或黄色澄清液弱阳性 样品管比空白对照管颜色深，且量示淡黄色或微黄色澄清液阴性 样品管与空白对照管同色或更淡在给定条件下，每分钟每克试样分解尿索所释放氨基氮的毫克数.
7其他
该方法为定性法，当称样量为0.10g或相当于0.10g固形物含量时，检出限均为0.005U/g.
第二法滴定法
8原理
脲酶在pH7.0、30C条件下，催化尿素转化成碳酸铵，碳酸铵经过量盐酸中和，再用氢氧化钠标准溶液回滴，根据氢氧化钠溶液的消耗体积计算豚酶含量.
9试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水.
9.1试剂
9.1.2氢氧化钠（NaOH）. 9.1.1尿素（HNCONH）.9.1.3盐酸（HCI).9.1.4磷酸氢二钠（NaHPO）.9.1.6甲基红（C；H；NO）. 9.1.5磷酸二氢钾（KHPO）.9.1.7澳甲酚绿（CHBrO S）.9.1.895%乙醇（CHOH）.
9.2试剂配制
9.2.1尿素缓冲溶液（pH7.0±0.1）：称取3.55g磷酸氢二钠、3.40g磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL.称取30g尿素，溶于上述缓冲溶液中，混匀，转移至棕色试剂瓶，于2℃～8℃冰箱中避光保存，有效期1个月.9.2.2盐酸溶液（0.1mol/L)：移取8.3mL盐酸，用水稀释至1000mL，混匀. 9.2.3氢氧化钠标准溶液（0.05mol/L)：按GB/T 601规定的方法配制0.1mol/L氢氧化钠标准溶液，
