SN/T 4809-2017 进出口食用动物、饲料中甲硝唑和二甲硝咪唑药物的测定 液相色谱-质谱/质谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 4809-2017

进出口食用动物、饲料中甲硝唑和二甲硝 咪唑药物的测定液相色谱-质谱/质谱法

Determination of metronidazole and dimetridazole in edible animal andtheir feeds forimport and export-LC-MS/MSmethod

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

中华人民共和国出人境检验检疫

行业标准

进出口食用动物、饲料中甲硝唑和二甲硝咪唑药物的测定液相色谱-质谱/质谱法

SN/T4809-2017出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029） 北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010）68533533网址 印数1-500书号：-33258定价18.00元

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.

本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、山东畜牧兽医职业学院.

本标准主要起草人：张金玲、郭礼强、孙明君、李凯、侯建波、吴伟、张晓文、邵二波、崔晓娜、王洪涛.

进出口食用动物、饲料中甲硝唑和二甲硝 咪唑药物的测定液相色谱-质谱/质谱法

1范围

硝味唑及其代谢物经基二甲确咪唑残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法. 本标准规定了进出口饲料中甲硝唑和二甲确味唑、食用动物中甲硝唑及其代谢物羟基甲硝唑，二甲

本标准适用于进出口饲料中甲硝唑和二甲硝咪唑、畜禽血清和尿液中甲硝唑及其代谢物经基甲硝唑，二甲硝味唑及其代谢物经基二甲硝咪唑残留量的测定.

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3方法原理

样品用乙酸乙酯提取，氮气吹干后经盐酸溶液溶解，经混合型阳离子交换柱净化后，液相色谱-质诺/质谱法测定，内标法定量.

4试剂和材料

除特别规定外，试剂均为分析纯；水为符合GB/T6682规定的一级水.

4.4盐酸：36%~38%.

4.6氨水：25%~28%.

4.7甲酸：色谱纯，

4.8混合型阳离子交换柱：60mg/3ml.

4.90.1mol/L盐酸：移取5ml.盐酸（4.4）和595mL水混合.

4.10洗脱溶液：5mL氨水（4.6）和95mL甲醇（4.5）混合.

4.110.1%的甲酸水：1mL甲酸（4.7）和999mL水混合.

4.12定容液；取80mL0.1%的甲酸水（4.11），与20mL乙晴混匀.

4.13标准品：甲硝唑（Metronidazole，CHNO，CAS：443-48-1），纯度≥99.0%；羟基甲硝唑（Hydroxy Metronidazole，CH，NO，CAS：4812-40-2），纯度≥99.0%：二甲硝咪唑（Dimetridazole，CH，N O，CASNo.551-92-8），纯度≥99.0%：羟基二甲硝咪唑（Hydroxy Dimetridazole，CH，NO， CASNo.936-05-0)，纯度≥99.0%；代二甲硝咪睡（Dimetridazole-D3，CHDNO，CASNo.64678-

69-9），纯度≥99 0%尔代羟基二甲硝咪睡（HydroxyDimetridazole-D3，CH D N O，CASNo.-78-3)，纯度≥99.0%.

4.14标准储备溶液：准确称取每种标准品（4.13）0.01g于100mL容量瓶，先用少量甲醇溶解，再用甲醇定容至刻度，混匀，配制成终浓度为100pg/mL的标准储备溶液，在0℃~4C冰箱中保存，有效期6个月.

4.15标准中间溶液：准确移取每种标准储备溶液（4.14）1mL于100mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，混匀，配制成浓度1.0μg/mL的标准溶液：移取1mL1.0μg/mL的标准溶液于10mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，配制成终浓度均为100ng/mL的标准中间溶液.于0℃~4C冰箱中保存，有效期3个月.

4.16氛代内标工作溶液：准确移取氟代二甲硝咪唑和氧代经基二甲硝咪唑标准储备溶液（4.14）1mL于100mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，混匀.配制成浓度1.0μgmL的标准溶液：移取1mL1.0μg/mL的标准溶液于10mL容量瓶中.甲醇定容至刻度，配制成终浓度均为100ng/mL的内标工作溶液.于0C~4C冰箱中保存有效期3个月

4.17标准工作溶液：根据需要分别取适量标准中间溶液（4.15）.用水稀释成0.25ng/mL.0.5ng/ml，1.0ng/mL，2.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/ml的混合标准工作溶液，现用现配.

5仪器和设备

5.1液相色谱-质谱/质谱联用仅：配电喷雾离子源（ESI）

5.2分析天平：感量分别为0.01mg和0.0lg.

5.3高速组织搞碎机.5.4离心机：10000r/min. 5.5涡旋混合器.5.6聚丙烯离心管：50ml.5.7微孔滤膜：0.22μm滤膜.

6样品制备与保存

从采集样品中取出有代表性样品，饲料样品经高速组织搞碎机均匀捣碎或混匀，用四分法编分出适量试样：血液样品待血液固后分离出血清：尿液样品直接混匀，各均分为2份，装人干净无污染的密封袋或样品瓶中，做出标记，于-18飞冷冻保存.

7测定步骤

7.1提取

7.1.1尿液

准确量取4mL样品，置于50mL聚丙烯离心管（5.6）中，加人4mL水，再加人内标工作溶液50mL聚丙烯离心管，残渣再次用15mL.乙酸乙酯涡混重复提取，合并提取液，氮气吹干，加人0.1mol/L盐酸（4.9）25mL，涡混均匀.待净化.

7.1.2血清

准确量取2mL样品，置于50mL聚丙烯离心管（5.6）中，加人内标工作溶液（4.16）40pL.混匀后

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