中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 4816-2017
进出口食用动物中磺胺类药物残留量的 测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of sulfonamides residues in live animals for import andexport-LC-MS/MS
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局.本标准主要起草人：姚佳、张旭东、苏明明、同超杰、孙兴权、孙剑、丁艳、刘芳伊.
进出口食用动物中磺胺类药物残留量的 测定液相色谱-质谱/质谱法
1范围
本标准规定了进出口食用动物的血清、尿液中共计14种磺胺药物残留量高效液相色谐-质谱/质谐测定方法.
本标准适用于禽类和畜类动物血清，畜类动物尿液的磺胺间二甲氧基嘧啶、磺胶邻二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉、三甲氧羊胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲氧哒嗪、磺胺-5-甲氧嘧啶、磺胺-6-甲氯啶、磺胺二甲基密啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基异晒唑、磺胺嘧啶、磺胺哦啶残留量的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
血清中磺胺类药物用乙請和乙酸乙酯提取，尿液中磺胺类药物用乙酸乙酯提取，经乙請饱和的正已烷脱脂净化.用HPLC-MS/MS检测，外标法定量.
4试剂和材料
4.1除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.4正己烷：色谱纯.
4.6甲酸：色谱纯.
4.70.1%甲酸溶液：移取1mL甲酸（4.6），用水稀释并定容至1000mL.混匀.
4.9空白基质提取液的配制：分别取阴性的血清和尿液样品1mL.按7.1操作，
4.10标准物质：磺胺间二甲氧基嘧啶、磺胺邻二甲氧喀啶、磺胺喹恶啉、三甲氯苄胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲氧哒嗪、磺胺-5-甲氧嗜啶、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺二甲基密啶、磺胺甲基密啶、磺胺噻唑、磺胺甲 基异唑、磺胺嘧啶、磺胺吡啶，纯度大于或等于99%.
解，定容至刻度，摇匀，得磺胺各标准储备液.每种磺胺标准品的浓度为100μg/mL.1℃～4C冰箱保存，有效期1个月.
4.12基质混合标准工作溶液：根据每种磺胺的灵敏度和仪器线性范围，用空白基质提取液配制成不同
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浓度（ng/mL）的基质混合标准工作溶液，基质混合标准工作液在1℃C~4C冰箱保存，可使用两周.
5仪器和设备
5.3旋转蒸发器.5.6分析天平：感量0.1mg和0.01g各5.7真空泵.5.8离心机.5.100.22μm有机相微孔滤膜. 5.9超纯水机.
5.1高效液相色谱串联二级质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）.
5.2均质器.
5.4氮吹仪.
5.5涡旋混均器.
6试样制备与保存
6.1试样制备
器分装，做好标签，尿液样品装人洁净的容器中加封做好标签.制样过程中应防止试样受到微生物及 将采集的血液置于未加抗凝剂处理的试管中，避光静置过夜，离心，上清液为血清，将血清用无菌容化学物的污染或发生残留变化
6.2试样保存
血清样品于一5℃~一2℃条件下保存尿液样品于一 一18C条件下保存
7测定步骤
7.1提取和净化
7.1.1血清：移取试样1mL或称取试样1g（精确至0.1g）.置于50mL塑料离心管中，加人1mL水和0.6g氯化钠，混匀.加入乙晴4ml，摇匀.再加人11mL乙酸乙酯，充分涡旋提取，8000r/min离 心5min.准确移取8mL上清液置于鸡心瓶中，38C水浴中减压浓缩至近干.加人1mL流动相（0.1%甲酸：乙睛为76：24）溶解残渣，再加1mL乙晴饱和的正已烷，振摇，溶液转移至玻璃离心管中.3000r/min离心5min，移取下清液过微孔滤膜，供液相色谱申联质谱仪测定.
7.1.2尿：移取试样1mL或称取试样1g（精确至0.1g），置于50mL塑料离心管中，加人1mL水和2.5g氟化钠，混匀，加人15mL乙酸乙酯，充分涡旋提取，8000r/min离心5min.准确移取8mL上 清液置于鸡心瓶中，38C水浴中减压浓缩至近干，加入1mL流动相（0.1%甲酸：乙晴为76：24）溶解残渣，再加1mL乙睛饱和的正已烷，振摇，溶液转移至玻璃离心管中，3000r/min离心5min，移取下清液过微孔滤膜，供液相色谱申联质谱仪测定.
7.2测定条件
7.2.1液相色谱条件
液相色谱条件：
a）色谱柱：C18，150mm×3.0mm（内径），粒度：3.5μm：或相当者：b）流动相：A-0.1%甲酸，B-乙，梯度洗脱，洗脱条件见表1；c）流速：0.3mL/min；d）色谱柱温度：35℃； e）进样量：10μl
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min 流动相A 流动相B0.0 76 240 3 76 248.5 55 458.51 809.51 9.5 80 2414.0 24
7.2.2质谱条件
质谱条件：
a）离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子扫描模式b） 检测方式：多重反应检测（MRM）：d）定性离子对、定量离子对、驻留时间（Dwellaime）、去电压（DP）碰撞能量（CE）、碰擅室出口 c) 其他质谱参考条件参见附录电压（CXP）及摄人电压（V）等参数见表A1
7.2.3定量测定
类药物残留的响应值均应在仪器线性酒围内，对基质工作溶液和样液等体积参插进样.标准溶液的液 根据样液中被测物残留量的情况，选定峰面积相近的基质工作溶液.基质工作溶液和样液中磺胺相色谱-质谱/质谱多反应检测（MRM）色请图参见附录B.
7.2.4定性标准
按照上述仪器条件测定样品和标准工作溶液，样品中目标物质的保留时间与标准溶液中目标物的保留时间偏差在士2.5%范围内：定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判定样品中存在相应的被测物.
表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10 ±50允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30
7.2.5空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行.
