中华人民共和国国家标准
GB 23200.57-2016代替SN/T2322-2009
食品安全国家标准 食品中乙草胺残留量的检测方法
National food safety standards
Determinationofacetochlorresidueinfoods
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 中华人民共和国农业部 国家食品药品监督管理总局
GB 23200.572016
本标准代替SN/T2322-2009《进出口食品中乙草胺残留量检测方法》.本标准与SN/T2322-2009相比,主要变化如下:一标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式:一标准名称中“出口食品”改为“食品”: 一标准范围中增加“其它食品可参照执行”.本标准所代替标准的历次版本发布情况为:SN/T .
食品安全国家标准
食品中乙草胺残留量的检测方法
1范围
本标准规定了食品中乙草胺残留量的气相色谱测定、气相色谱-质谱确证和制样方法.本标准适用于花生、大豆、玉米、小麦、洋葱、海菜、鸡肉、猪肉、腰果和松茸中乙草胺残留量的测定,其它食品可参照执行.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括的修改单)适用于本文件.GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
净化,用气相色谱法(GC)测定和气相色谱-质谱法(GC-MIS)确证,外标法定量. 试样中的乙草胺残留物用乙睛或乙酸乙酯提取,经凝胶渗透色谱仪(GPC)和/或硅胶固相萃取柱(SPE)
4试剂和材料
除另有规定外,试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682中规定的一级水.
4.1试剂
4.1.2乙酸乙酯(CHO). 4.1.1正已烷(CH4).4.1.3环已烷(CH2).4.1.4乙晴(CHN). 4.1.5丙酮(CHO).4.1.6无水硫酸钠(NaSO4):分析纯:650C灼烧4h,贮于密封容器中备用.
4.2溶液配制
4.2.1乙酸乙酯-正已烷(397,V/V):取30mL乙酸乙酯,加入970mlL正已烷,摇匀备用.4.2.2乙酸乙酯-正已烷(595,V/V):取50mL乙酸乙酯,加入950mlL正已烷,摇匀备用.4.2.3乙酸乙酯-环已烷(5050,V/V):取500mL乙酸乙酯,加入500mL正己烷,摇匀备用.
4.3标准品
4.3.1乙草胺标准品(acetochlor,CHgCINO,CAS No.:34256-82-1):纯度≥98%.
4.4.1乙草胺标准溶液:准确称取适量的乙草胺标准品,用丙酮配成浓度为100μg/mlL的标准储备液. 根据需要将标准储备溶液用正已烷稀释成适当浓度的标准工作液.标准储备液和标准工作液避光在0C~4C条件下贮存.有效期6个月.
5仪器与设备
5.1气相色谱仪:配微池电子捕获检测器(u-ECD).5.2气相色谱-质谱仪:配电子轰击源(EI). 5.3凝胶渗透色谱仪.5.4旋转蒸发仪.5.6高速均质器5.7硅胶固相萃取柱:6mL/1000mg,或相当者:使用前用10mL正已烷淋洗.5.8离心管:100ml,塑料和玻璃. 5.9滤膜:0.45μm,有机相.5.10分析天平:感量0.01g和0.0001g.
5.5离心机:5000r/min.
6试样制备与保存
6.1蔬菜类、食用菌类
6.1.1取洋葱等有代表性辛辣蔬菜样品约500g,将其切成约4cm的小块.装入洁净的容器内,密闭并标明标记.-18C以下保存.
6.1.2取有代表性蔬菜样品(洋葱等辛辣蔬菜除外)和松茸等有代表性食用菌样品约500g,将其用捣 碎机将样品加工成浆状.混匀,装入洁净的容器内,密闭并标明标记.-18C以下保存.
6.2海菜
闭并标明标记.-18C以下保存. 取海菜有代表性样品约500g,切碎后,用捣碎机将样品加工成浆状.混匀,装入洁净的容器内,密
6.3粮谷和坚果类
取花生、玉米、小麦、大豆、腰果等有代表性样品约500g,用粉碎机粉碎,混匀,装入洁净的容器内,密闭并标明标记.4C以下保存
6.4动物源类
取鸡肉、猪肉等有代表性样品约500g,用绞肉机绞碎,混匀,装入洁净的容器内,密闭并标明标记.-18C以下保存.
注:以上样品取样部位按GB2763附录A扶行.
7测定步骤
7.1提取
上匀浆2min.以4000r/min离心10min,将上清液倒入浓缩瓶中,浓缩至干,用10ml乙酸乙酯- 粮谷、坚果:称取试样10g(精确至0.1g)于100mL塑料离心管中,加入50mlL乙晴,在匀浆器环已烷溶液溶解残渣,过膜,供凝胶渗透色谱(GPC)净化.
匀,加入50mL乙睛,在匀浆器上匀浆2min.以4000r/min离心10min,将上清液用无水硫酸钠脱 禽肉组织:称取试样10g(精确到0.1g)于100mlL塑料离心管中,加入5g无水硫酸钠,搅拌均水后倒入浓缩瓶中,浓缩至干,用10mL乙酸乙酯-环已烷溶液溶解残渣,过膜,供凝胶渗透色谱(GPC)净化.
恢复至室温,加入50mL乙酸乙酯,在匀浆器上匀浆2min.以4000r/min离心10min,将上清液倒 洋葱:称取试样5g(精确至0.1g)于100mL玻璃离心管中,在700w消解功率下微波消解40s.入浓缩瓶中,浓缩至干,用1m正已烷溶解残渣,供固相萃取柱净化.
浆器上匀浆2min.以4000r/min离心10min,将上清液倒入浓缩瓶中,浓缩至干,用1mL正已烷溶 海菜、松茸:称取试样5g(精确至0.1g)于100mL玻璃离心管中,加入50mL乙酸乙酯,在匀解残渣,供固相萃取柱净化.
7.2净化
7.2.1凝胶渗透色谱净化条件
a)色谱柱:S-X20×2cm(内径),或相当者:b)流动相:环己烷-乙酸乙酯(11,V/V): c)流速:5.0mL/min;d)进样量:5.0ml;e)淋洗体积:40mL: f)收集体积:30mlL:g)清洗体积:10mlL.
7.2.2凝胶渗透色谱净化
将7.1节中粮谷、坚果和禽肉组织的提取液过滤膜注入凝胶渗透色谱仪中,收集40~70mlL流出液,在40C水浴上减压浓缩至干,用1mL正已烷溶解残渣,供固相萃取柱净化.
7.2.3硅胶固相萃取柱净化
烷润洗盛样液容器,注入硅胶柱中,依次用10mL正已烷、5m乙酸乙酯-正已烷溶液和5mL乙酸乙酯 将7.1节中洋葱、海菜、松茸提取液和7.2.2节净化液注入硅胶固相萃取柱中,再用2×1mL正已-正已烷溶液淋洗,再用15mL乙酸乙酯-正已烷溶液洗脱,收集洗脱液于40C水浴减压浓缩至干,用正已烷定容至5ml,供气相色谱测定和气相色谱-质谱确证.
7.3测定
7.3.1气相色谱参考条件
a)色谱柱:DB-5石英毛细管柱,30m×0.32m(内径),膜厚0.25μm 或相当者:
b)色谱柱温度:60℃(1min) c)进样口温度:250C; 260C(5min),300℃(后运行15min):d)检测器温度:325C;e)载气:氮气,纯度≥99.995%,1.8ml/min: f)进样量:1μ:g)进样方式:无分流进样,0.75min后开阀:
7.3.2气相色谱-质谱参考条件
a)色谱柱:DB-5MS石英毛细管柱,30mX0.25mm(内径),膜厚0.25Hm 或相当者:b)色谱柱温度:60°C(1min)5e/htm→260°C(5min),300°C(后运行15min):c)进样口温度:250C:e)载气:氮气,纯度≥99.995%,1.0ml/min; d)色谱-质谱接口温度:280C:g)进样方式:无分流进样,0.75min后开阀: f)进样量:1叫:h)电离方式:EI:i)电离能量:70eV:k)监测离子(m/z):定量162,定性174、234、269: j)测定方式:选择离子监测方式(SIM):1)溶剂延迟:3min
7.3.3气相色谱测定
根据样液中乙草胺含量情况,选定浓度相近的标准工作溶液.标准工作溶液和样液中乙草胺响应值均应在仪器检测线性范围内.标准工作溶液和样液等体积参插进样测定.在上述色谱条件下,乙草胺的保留时间约为12.3min.标准品的色谱图见附录A图A.1.
7.3.4气相色谱-质谱确证
乙草胺标准溶液及样液均按7.3.2节规定的条件进行测定,如果样液与标准溶液相同的保留时间有峰出现,则对其进行质谱确证.经确证分析被测物SIM色谱峰保留时间与标准样品相一致,并且在扣除背景 后的样品谱图中,所选择的离子均出现:选择离子m/z162、174、234、269(其丰度比100:54:24:8)与标准样品相关离子的相对丰度一致,相似度在允许偏差差之内(见表1),则可判定样品中存在乙草胺.乙草胺标准品总离子流色谱图、选择离子质谱图和全扫描质谱图见附录A图A.2、A.3和A.4.
表1GC-MS确证相对离子丰度的最大允许偏差
相对丰度(基峰) >50 % >20 %至 50 % >10 %至 20 % ≤10 %允许的相对偏差 ±20 % ±25 % ±30 % ±50 %
7.4空白试验
除不加试样外,均按上述步骤进行.
8结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中乙草胺的含量,计算结果需将空白值扣除.
式中:
X-一试样中乙草胺的含量,毫克/千克,mg/kg: 标准工作液中乙草胺的浓度,单位为微克/毫升,口g/ml:A-一样品溶液中乙草胺的峰面积: cA -一标准工作溶液中乙草胺的峰面积: 样液最终定容体积,单位为毫升,ml:m 最终样液所代表的试样量,单位为克,g:
注:计算结果须扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留两位有效数字.
9精密度