中华人民共和国国家标准
GB 31657.8-2025
食品安全国家标准 蜂产品中双甲胖及其代谢物残留 量的测定液相色谱-串联质谱法
National food safety standardDetermination of amitraz and its metabolites residues in beeproducts by liquid chromatography-tandem mass spectrometry method
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会发布国家市场监督管理总局
前言
本文件按照GB/T1.1-2020（标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
食品安全国家标准 蜂产品中双甲胖及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本文件适用于蜂蜜和蜂王浆中双甲胖、2.4-二甲基苯胺残留量的测定. 本文件规定了蜂产品中双甲、2，4二甲基苯胺残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
蜂蜜和蜂王浆中残留的药物用磷酸盐缓冲液和乙晴提取，氯化钠和无水硫酸镁基质固相分散净化液相色谱-串联质谱检测，外标法定量.
5试剂和材料
以下所用试剂，除特殊注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682中规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1甲酸（HCOOH）：色谱纯.5.1.2乙晴（CHCN）：色谱纯.5.1.3磷酸二氢钾（KHPO）. 5.1.4无水硫酸镁（MgSO）.5.1.5氯化钠（NaCI).
5.2.20.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL.用水稀释至1000mL，混匀.5.3标准品及其纯度：双甲胖、2.4-二甲基苯胺，含量均≥98%，具体信息见附录A.
5.4标准溶液配制
5.4.1单一标准储备液：分别准确称取2种药物标准品适量，用乙晴溶解，定容至10ml.配制成1000mg/L5.4.2混合标准储备液：分别准确吸取2种药物标准储备液100pL于10mL容量瓶中，用乙晴定容至 的标准储备液，于一18℃避光保存，有效期3个月.10mL.配制成浓度为10mg/1的混合标准储备液，于-18℃避光保存，有效期1个月.5.4.3混合标准工作液：分别准确吸取适量2种药物混合标准储备液1mL，于10mL容量瓶中，用乙定容至10mL，配制成浓度为1mg/L的的双甲胖及其代谢物混合标准工作液，于4C避光保存，有效期
1个月，
GB 31657. 8-2025
5.5材料
微孔尼龙滤膜：0.22μm.
6位器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾电离源.6.2涡旋振荡仪.6.3高速离心机：转速8000r/min或以上.6.4分析天平：感量0.00001g和0.01g.
7试样的制备与保存
7.1试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试蜂产品，将其搅拌均匀，对有结晶的蜂蜜样品，在密闭情况下，置于不超过60C的水浴中解晶，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温.制备好的试样置于样品瓶中密封，并做上标记，
b）取均质后的空白样品作为空白试样； a）取均质后的供试样品，作为供试试样；c）取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样.
7.2试样的保存
蜂蜜样品于室温下避光保存：蜂王浆样品于一18℃下保存.
8测定步骤
8.1提取
8.1.1蜂蜜
mL.乙晴，涡旋振荡5min，加人约5g氯化钠、5g无水硫酸镁，立即剧烈振摇或涡旋振荡5min.于4C下 称取蜂蜜试料（5土0.05）g于50mL具塞塑料离心管中，加入5mL磷酸盐缓冲液，涡旋混匀.加人5.08 000r/min离心5min.准确量取0.5mL上清液于1.5mL塑料离心管中，用水稀释至1.0mL，混匀经0.22um尼龙滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱测定.
8.1.2蜂王浆
称取蜂王浆试料（2土0.05）g于50mL具塞塑料离心管中，加人2mL磷酸盐缓冲液，涡旋混匀，加人4℃下8000r/min离心5min，取0.5mL上清液于1.5mL塑料离心管中，用水稀释至1.0mL，混匀经 10mL乙睛，涡旋振荡5min，加人约3g氯化钠、3g无水硫酸镁，立即剧烈振摇或涡旋振荡5min.于0.22μm尼龙滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱测定.
8.2基质匹配标准曲线的制备
为 1.0μg/L、5.0μg/L、10μg/L、15μg/L、20μg/L 25.0μg/L的基质匹配系列混合标准溶液，供液相色 精密量取混合标准工作液适量，分别加入经提取和净化的蜂蜜或蜂王浆空白试料溶液中，配制成浓度谱-串联质谱测定，以待测物的峰面积为纵坐标、相应的标准溶液浓度为横坐标，绘制基质匹配标准曲线，计算回归方程和相关系数.
8.3测定
8.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：C色谱柱（100mm×2.1mm，2gm）或相当者； b）流动相：A为0.1%甲酸溶液，B为甲醇梯度洗脱程序见表1；c）流速：0.3mL/min；d）柱温：35C；e）进样量：10pL.
