中华人民共和国国家标准
GB 31659.4-2025
代替GB 29696-2013 和 GB 31659.4-2022
National food safety standardDetermination of avermectins residues in milk andmilk powder
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会发布国家市场监督管理总局
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
本文件代替GB29696-2013《牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定高效液相色谱法》及谱法》
与GB29696-2013相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术内容变化如下：
b）更改了部分测定步骤；
--本文件为第一次修订.
a）更改了标准适用范围，扩大至牛奶、羊奶及奶粉等；
GB 29696-2013 和I GB 31659 4-2022;
食品安全国家标准 奶及乳粉中阿维菌素类药物残留量的测定
方法一高效液相色谱法
1范围
本文件规定了奶及乳粉中乙酰氨基阿维菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法.
阿维菌素Bla单个或多个药物残留量的检测，其他类型奶及乳粉的检测可参照执行.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样中残留的阿维菌素类药物用乙醇-乙晴溶液提取，C固相萃取柱净化，三氟乙酸酐和N-甲基咪唑衍生化，高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量.
5试剂与材料
除另有规定外，试剂均为分析纯；水为符合GB/T6682规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1乙晴（CHCN）：色谱纯，5.1.2甲醇（CHOH）：色谐纯.5.1.4异辛烷[（CH） CCHCH(CH）]. 5.1.3无水乙醇（CHOH）：色谱纯5.1.5三乙胺（N（CHCH））.5.1.6三氟乙酸酐（CFO）.5.1.7N-甲基唑（CHN）.
5.2标准品
阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素含量均≥94%.具体见附录A.
5.3.120%乙醇乙晴溶液：取无水乙醇20mL用乙晴稀释至100mL.
5.3.3衍生化试剂
a）A液：取N-甲基咪唑5mL、乙晴5mL，混匀.现用现配.b）B液：取三氟乙酸酐5mL、乙晴10mL，混匀.现用现配.
GB 31659.4-2025
5.4标准溶液配制
5.4.1阿维菌素类药物混合标准储备液：分别称取乙酰氨基阿维菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标储备液，一18℃保存，有效期6个月.稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的混合标准工作液.一18C保存，有效期3个月.期3个月.
准品各约10mg精密称定，用乙晴溶解并定容至10mL容量瓶中配制成浓度为1mg/mL的混合标准5.4.2阿维菌素类药物混合标准中间液：准确量取混合标准储备液0.25mL于25mL容量瓶中，用乙晴5.4.3阿维菌素类药物混合标准工作液（1μg/mL)：准确量取阿维菌素类药物混合标准中间液2.5mL于25mL容量瓶中，用乙稀释至刻度，配制成浓度为1μg/mL的混合标准工作液.一18C保存，有效0.25mL于25mL容量瓶中，用乙稀释至刻度，配制成浓度为100ng/mL的混合标准工作液.-18℃保存，有效期3个月，5.5材料5.5.1C固相萃取柱：500mg/6mL，或相当者.5.5.2微孔尼龙滤膜：0.45pm
6仪器设备
6.1高效液相色诺仪：配荧光检测器.6.2分析天平：感量0.01g和0.00001g.6.3振荡器.6.5氮吹仪. 6.4离心机.6.6涡旋混合器.6.7恒温电热箱.6.8固相萃取装置.6.9具塞玻璃离心管：10mL.
7试样的制备与保存
7.1试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试牛奶或羊奶及奶粉，混合均匀.a）取混匀后的供试样品，作为供试试样：b）取混匀后的空白样品，作为空白试样； c）取混匀后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样.
7.2试样的保存
7.2.1牛奶和羊奶：冷藏避光或-18℃以下保存.7.2.2奶粉：阴凉干燥处保存.
8测定步骤
8.1提取
称取牛羊奶试料（5士0.05）g、奶粉（0.5士0.05）g于50mL离心管中，奶粉样品加4g水溶解，充分混匀.奶及奶粉试样加20%乙醇乙晴落液8mL，涡旋混匀，250r/min振荡5min.5000r/min离心10min，收集上清液于另一50mL离心管中，残渣再重复提取1次.合并2次上清液，加水15mL和三乙胺50uL混匀，备用.
