中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准 牛可食性组织及牛奶中氮氨菲啶残留量的 测定液相色谱-串联质谱法
Nationalfood safety standard
Determination of isometamidium residues in bovine tissue and milk by
liquid chromatography-tandem mass spectrometricmethod
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
发布
前言
本标准系首次发布.
食品安全国家标准
牛可食性组织中氮氨菲啶残留量的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛肌肉、脂肪、肝脏、肾脏及牛奶中氮氨菲啶残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法.
本标准适用于牛肌肉、脂肪、肝脏和肾脏及牛奶中氮氨菲啶残留量的检测.
2规范性引用支件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试料中残留的氮氨菲啶，用乙晴、甲酸铵-甲醇溶液提取，正已烷脱脂，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量.
4试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯.4.1.2乙晴（CHCN）：色谱纯.4.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯.4.1.5无水硫酸钠（NaSO）.
4.1.4正已烷（CH）.
4.1.6甲酸铵（HCOONH）.
4.2溶液配制
4.2.10.25mol/L甲酸铵-甲醇溶液：取甲酸铵15.8g，用甲醇溶解并稀释至1000mL.4.2.20.1%甲酸溶液：取甲酸1.0mL，用水溶解并稀释至1000mL.4.2.380%甲醇溶液：取甲醇400mL，用水溶解并稀释至500mL.4.2.4提取液：取乙和0.25mol/L甲酸铵-甲醇溶液按1：1（体积比）混匀.
4.3标准品
盐酸氮氨菲啶（Isometamidium Chloride CsHasCIN CAS号：34301-55-8），含量≥95.0%.
4.4标准溶液的制备
4.4.1标准贮备液：取氮氨菲啶标准品10mg，精密称定，于10mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准贮备液.-20℃以下保存.4.4.210pg/mL氮氨菲啶标准工作液：精密量取标准贮备液100uL，于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的氮氨菲啶标准工作液.-20℃以下保存.4.4.3100ng/mL氮氨菲啶标准工作液：精密量取10pg/L的氮氨菲啶标准工作液1mL，于100mL量瓶中，用80%甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100ng/mL的氮氨菲啶标准工作液.2～8C保存.
4.5材料 滤膜：0.22μm.
5仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源.5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g.5.3漩涡振荡器.5.4振荡器.5.5组织匀浆机.5.6冷冻离心机.5.7旋转蒸发仪.5.8鸡心瓶：50mL.5.9离心管：50mL.6试料的制备与保存
6.1试料的制备
6.1.1牛奶
取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合均匀.一-取均质后的供试样品，作为供试试料.一一取均质后的空白样品，作为空白试料.一一取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料.
6.1.2肌肉、脂肪、肝脏和肾脏组织取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质.
一一取均质后的供试样品，作为供试试料.
GB31660.82019
一一取均质后的空白样品，作为空白试料.
-取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料.
6.2试料的保存
-18℃以下保存.
7测定步骤
7.1提取
称取试料5g（准确至土20mg），于50mL离心管中，加无水硫酸钠2g，再加提取液10mL，涡旋混匀，振荡5min，6000r/min离心10min，取上层液于鸡心瓶中.残渣中加提取液10mL重复提取一次，合并两次提取液于鸡心瓶中，于45℃水溶旋转蒸发至干.备用.
7.2净化
加80%甲醇溶液2mL于鸡心瓶中，充分涡旋溶解残余物，加正已烷2mL振荡混合1min，转移至10mL离心管中，6000r/min离心5min，弃上层正已烷液.再加正已烷2mL，重复提取一次.取下层清液，滤过，供液相色谱-串联质谱测定.
7.3基质匹配标准曲线的制备
精密量取100ng/mL氮氨菲啶标准工作溶液或10μg/mL氮氨菲啶标准工作溶液适量，于经提取、蒸干后的空白试料残余物中，用适量80%甲醇溶液溶解并稀释至2.0mL，使氮氨菲啶浓度为20、50、100、200、500、1000ng/mL，滤过，制成系列基质匹配标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定.以特征离子峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.
7.4测定
7.4.1液相色谱条件
a）色谱柱：BEHCs（100mmx2.1mm，1.7μm)，或相当者：b）柱温：30°C;c）流速：0.2mL/min:d）进样量：10μL;e）流动相：AB=5050，其中A相为乙（含0.1%甲酸），B相为水（含0.1%甲酸）.
7.4.2质谱条件
a）电离模式：ESI：b）扫描方式：正离子扫描：e）检测方式：多反应检测：
