中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.58-2008代替GB/T 14926.582001

实验动物 传染性犬肝炎病毒检测方法

Laboratory animalMethod for examination ofInfectious canine hepatitis virus

中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

GB/T14926《实验动物》共54个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法. 本部分自实施之日起代替GB/T14926.58-2001《实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法》.本部分与GB/T14926.58-2001相比主要技术差异如下：a）传染性犬肝炎是犬的主要烈性传染病之一，在我国犬群中广泛流行，是基础级犬和SPF犬的必检项目；b）“6结果判定”中增加了“6.3基础级犬群体免疫抗体合格率：免疫抗体合格率=（被检动物 抗体阳性数/被检动物总数）×100%.基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于70%以上可判为该大群免疫合格”内容.本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口.本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草.本部分主要起草人：田克恭、贺争鸣、范薇. 本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 14926. 582001.

实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法

1范围

本部分适用于犬ICHV的检测.

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过GB/T14926的本部分的引用而成为本部分的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分.

GB/T14926.50实验动物酵联免疫吸附试验GB/T14926.54实验动物血凝抑制试验

3原理

根据免疫学原理，采用ICHV抗原检测犬血清中ICHV抗体：或根据ICHV在一定的条件下，能凝集人"O”型红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测大血清中1CHV抗体.

4主要试剂和器材

4.1试剂

4.1.1ELISA抗原

4.1.1.1特异性抗原

十十重：严重，下同）时收获.冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再 用ICHV感染MDCK细胞，接种3d~4d后，当病变达~（-阴性；轻；中；经超速离心浓缩后制成ELISA抗原.

4.1.1.2正常抗原

MDCK细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液.

4.1.2血凝素

ICHV接种MDCK细胞，培养3d~4d，当病变达~时收获培养物.冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液分装后低温保存.

4.1.3阳性血清

ICHV实验感染或自然感染的犬血清.

无1ICHV感染、未经免疫的犬血清.

4.1.5酶结合物

辣根过氧化物酶标记羊或兔抗大IgG抗体.

4.1.6人"O”型红细胞.

4.2器材

4.2.1酶标仪.

4.2.237C培养箱或水浴箱.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.57-2008代替GB/T 14926.57-2001

实验动物 犬细小病毒检测方法

Laboratory animalMethod for examination of Canine parvovirus

中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

GB/T14926《实验动物》共54个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法， 本部分自实施之日起代替GB/T14926.57-2001《实验动物犬细小病毒检测方法》.本部分与GB/T14926.57-2001相比主要技术差异如下：a）在“3原理”中“或根据CPV在一定的条件下，能凝集猪的红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测大血清中CPV抗体”修改为"或根据CPV在一定的条件下，清中CPV抗体"；99（9c）“6结果判定"中增加了"6.3基础级犬群体免疫抗体合格率免疫抗体合格率=（被检动物抗体阳性数/被检动物总数）×100%.基础级大群体免疫抗体合格率大于等于70%以上可判本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口， 为该犬群免疫合格”内容.本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草.本部分主要起草人：田克恭、贺争鸣、范薇.本部分所代替标准的历次版本发布情况为：-GB/T 14926. 57-2001.

实验动物犬细小病毒检测方法

1范围

GB/T14926的本部分规定了大细小病毒（CPV）的检测方法、试剂等.本部分适用于犬CPV的检测.

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过GB/T14926的本部分的引用而成为本部分的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分.

GB/T14926.50实验动物酶联免疫吸附试验GB/T14926.54实验动物血凝抑制试验

3原理

根据免疫学原理，采用CPV抗原检测犬血清中CPV抗体：或根据CPV在一定的条件下，能凝集猪或恒河猴的红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测犬血清中CPV抗体.

4主要试剂和器材

4.1试剂

4.1.1ELISA抗原

4.1.1.1特异性抗原

十十重：严重，下同）时收获.冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再 CPV感染FK81细胞，接种3d~5d后，当病变达~（-阴性；轻；中：经超速离心浓缩后制成ELISA抗原.

4.1.1.2正常抗原

FK81细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液.

4.1.2血凝素

CPV接种FK81细胞，培养3d~5d，当病变达~时收获.冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液分装后低温保存.

4.1.3阳性血清

CPV实验感染或自然感染的大血清.

无CPV感染、未经免疫的犬血清.

辣根过氧化物酶标记羊或兔抗大IgG抗体.

4.1.6猪或恒河红细胞.

4.2器材

4.2.1酶标仪.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.56-2008代替GB/T 14926.56-2001

实验动物 狂犬病病毒检测方法

Laboratory animal-Method for examination of Rabies virus

中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

GB/T14926《实验动物》共54个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法， 本部分自实施之日起代替GB/T14926.56-2001《实验动物狂犬病病毒检测方法》.本部分与GB/T14926.56-2001相比主要技术差异如下：a）删除原标准中“2引用标准”内容；b）对原标准中”3原理”中内容改为“在微孔板上预包被纯化狂犬病毒抗原，使免疫反应在固相载体上进行.当被检血清中有狂大病病毒抗体存在时，则与孔壁上的抗原形成抗原-抗体 复合物，再与抗犬IgG酶标记物反应，最后通过测定酵作用底物催化后的产物，进行定性检测”：c）删除原标准中关于血凝抑制试验的试剂、方法及结果判定：d）对原标准中关于酶联免疫吸附试验的内容进行修改，包括试剂、方法及结果判定等：e）对原标准中"6结果判定"中增加了"6.3基础级犬群体免疫抗体合格率：免疫抗体合格率= （被检动物抗体阳性数/被检动物总数）×100%.基础级犬群体免疫抗体合格率达到70%以上可判为该犬群免疫合格"内容.本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口.本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草.本部分主要起草人：田克恭、陈西钊、曹振、王传彬、何秀敏、汤汉文. 本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 14926. 562001.

实验动物狂犬病病毒检测方法

1范围

GB/T14926的本部分规定了狂犬病病毒（RV）的检测方法、试剂等.本部分适用于犬RV的检测.

2原理

在微孔板上预包被纯化狂犬病毒抗原，使免疫反应在固相载体上进行.当被检血清中有狂犬病病作用底物催化后的产物，进行定性检测.

3主要试剂和器材

3.1试剂

犬狂犬病毒IgG抗体检测试剂盒（定性），包括：

a）预包被狂犬病毒抗原的微孔板；b）狂犬病毒lgG酵标记物；c）狂犬病毒IgG阳性对照； d）狂犬病毒IgG临界对照；e）狂犬病毒lgG阴性对照；f）显色液A：磷酸氢=钠-柠檬酸缓冲液（0.05mol/L pH5.0)100mL 30%过氧化氢HOg）显色液B：柠檬酸1.052g.乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na）0.186g，四甲基联苯胺（TMB） (MW34. 0)3.5 mL;0.25g，二甲基亚矾（DMSO）8.0mL，纯化水992mL;h）终止液：98%硫酸27.8mL，纯化水972.2mL；i）10 倍浓缩洗涤液：PBS(0.1 mol/L pH7.2~7. 4)995 mL，吐温-20，5 mL;j）样品稀释液：硼酸盐缓冲液（0.01mol/LpH8.0）956.0mL，甘油（MW92.09）40.0mL，酪蛋白 （casein）10%硫柳汞钠溶液2.0mL，吐温-20，1.0mL1%酚红溶液，1.0mlL.试剂在使用前应恢复至室温（18C～25C）.

3.2器材

器材包括：

00~0（ b）一次性移液器吸头；c）振荡器；d）酶标仪（含450nm波长滤光片）；e）37C恒温培养箱；g）100mL量筒： {）蒸馏水或去离子水：h）离心机；i）吸水纸.

中华人民共和国国家标准

GB/T14926.55-2001

实验动物 免疫酶组织化学法

Laboratory animal-Immunohistochemistry(IH)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准规定了免疫酶组织化学法所用试剂、器材和操作步骤等.本标准起草单位：中国实验动物学会， 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.本标准主要起草人：贸争鸣.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.55-2001

实验动物免疫酶组织化学法

Laboratory animal-Immunohistochemistry(IH)

1范围

本标准规定了免疫酶组织化学法（IH）所用试剂、器材和操作步骤等.

本标准适用于实验动物病毒抗原的检测.

2原理

用已知的特异性抗体与标本中待测抗原反应，如待测抗原是特异性抗体的相应抗原则形成抗原抗体复合物.此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性，可与相应的第二抗体酶结合物结合，遇酶底物产生颜 色反应，在普通显微镜下，根据颜色的反应判定结果.

3主要试剂与器材

氯化钠 8.5 g磷酸二氢钠（NaHPO2HO） 磷酸二氢钠（NaHPO12HO) 0.20 g 3.12 g蒸馏水 加至 1 000 mL

3.1.4底物溶液

3 3-二胺基联苯胺盐酸盐（DAB） 40 mgPBS 丙酮 100 mL 5 mL3%过氧化氢 0. 1 mL

3.2器材

3.2.1石蜡切片机或冰冻切片机.3.2.3普通显微镜， 3.2.2载玻片及盖玻片.

4操作步骤

4.1冰冻切片风干后用丙酮固定10~15min，石蜡切片，常规脱蜡至PBS（切片应用白胶或铬矾明胶 做粘合剂，以防脱片）.

用0.3%过氧化氢甲醇溶液或1%盐酸酒精37C作用30min.

中华人民共和国国家标准

GB/T14926.54-2001

实验动物 血凝抑制试验

Laboratory animal-Haemoglutination inhibition test（HAI)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准修订了GB/T14926.24-1994（实验动物小鼠肺炎病毒检测方法》中的血凝抑制试验方法，将其作为一个独立标准列出.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：贸争鸣.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.54-2001

实验动物血凝抑制试验

Laboratory animal-Haemoglutination inhibition test(HAI)

1范围

本标准规定了血凝抑制试验（HA1）所用试剂、器材和操作步骤等.

本标准适用于实验动物病毒抗体的检测.

2原理

某些病毒在一定的条件下，能够选择性的凝集某些动物红细胞.这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制.

3主要试剂与器材

3.1试剂

3.1.1血凝素抗原

血凝抗原除部分病毒（如痘类病毒）能与感染性颗粒分开外，大部分是与病毒的感染性颗粒相关联，凡培养于鸡胚或组织培养中的病毒及其抗原物质，经离心除去沉淀，均可用作血凝抑制试验的血凝素抗原，见GB/T14926.52-2001中表1、表2.

3.1.2红细胞悬液

洗三次，再悬于pH7.4PBS中. 根据不同病毒血凝所需敏感红细胞制备悬液.一般将血液保存于阿氏溶液内，使用前pH7.4PBS

3.1.3阳性血清

3.1.4阴性血清

3. 1. 5 PBS(0. 01 mol/L pH7. 4)

氯化钠 氯化钾 8g 0.2 g磷酸二氢钾 0.2g磷酸氢二钠（NaHPO12HO) 2.83 g蒸馏水 加至 1 000 mL

3.1.6阿氏溶液

葡萄糖 2.05 g枸橡酸钠 0.8 g构橡酸 0 055 g氯化钠 蒸馏水 0.42 g 100 mL115C，30min灭菌，保存于4C.

3.2器材

中华人民共和国国家标准

GB/T14926.53-2001

实验动物 血凝试验

Laboratory animal-Haemoglutination test(HA)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准修订了GB/T14926.24-1994（实验动物小鼠肺炎病毒检测方法》中的血凝试验方法，将其作为一个独立标准列出.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：贸争鸣.

中华人民共和国国家标准

实验动物 血凝试验

GB/T 14926.53-2001

Laboratory animalHaemoglutination test(HA)

1范围

本标准规定了血凝试验（HA）所用试剂、器材和操作步骤等.本标准适用于实验动物病毒抗原的检测.

2原理

某些病毒在一定的条件下，能够选择性地凝集某些动物红细胞，产生可见的凝集反应.

3主要试剂与器材

3.1试剂

3.1.1血凝素

血凝素抗原除部分病毒（如痘类病毒）能与感染性颗粒分开外，大部分是与病毒的感染性颗粒相关联，凡培养于鸡胚或组织培养中的病毒及其抗原物质，经离心除去沉淀，均可用作血凝试验的抗原（见表1、表2）.

表1血凝素制备方法

病毒 细胞 收毒（d) 病变（） 抗原处理 滴度（HA） 备注KRV H-1 RE RE ~12 7~12 2~3 2--3 冻融 2~3 次 2 000 x/min 离心10~20min，取上清 64 128 128CPV FK81 3~5 3~4 离心10~20min，取上请 >640ICHV MDCK 3~ 4 3~4 培养物冻融后离心，取上 >1 28020 rsin 清、经60C水浴作用10~RV BHK21 4~5 2--3 冻融2~3次，2000x/min >320 基础液中含0.2%~0.4%离心20min取上清 牛血清白蛋白

表2血凝素制备方法

病毒 （日龄） 动物 接种连 径剂量 抗原取材 时间 (d) 抗原处理 滴度（HA）TMEV 小鼠 ic0 02 ml. 脑 5~7 研磨成10%悬液，冻化2~3次 128~512(14~21) 1 000 r/min离心10min上清对Sendai 鸡胚（9） 尿囊0.2ml 尿囊液 3 倍加0 5%胰酶，4℃可短期保存 2 000rpm离心10min，取上清液 640RHDV 免 sc 2 mL 肝 2~4 研磨成10%悬液3000r/min离 8 190心10min取上清

中华人民共和国国家标准

GB/T14926.52-2001

实验动物 免疫荧光试验

Laboratory animalImmunofluorescence assay(IFA)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准修订了GB/T14926.18-1994（实验动物淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的免疫荧光试验方法，将其作为一个独立标准列出.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：贺争鸣.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.52-2001

实验动物免疫荧光试验

1范围

本标准规定了免疫荧光试验（IFA）所用试剂、器材和操作步骤等.本标准适用于实验动物病毒抗体的检测.

2原理

含有病毒抗原的细胞（组织培养细胞或动物组织细胞）固定于玻片上，遇相应抗体形成抗原抗体复合物.此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性，可与相应的第二抗体荧光素结合物结合.荧光素在紫外 光或蓝紫光的照射下，可激发出可见的荧光.因此，在荧光显微镜下以荧光的有无和强弱判定结果.

3主要试剂与器材

3.1试剂

3.1.1抗原片的制备

将病毒接种于敏感细胞上（见表1），待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后，用胰酶消化下细胞，PBS洗涤三次，用适量PBS悬浮细胞，将细胞悬液滴于玻片孔中.同时消化未感染病毒的同批细胞，滴加同一玻片另一孔内，作为正常细胞对照.孔内滴加的细胞以细胞铺开、不重叠为宜.室温干燥后，冷丙酮（4C）固定10min.PBS漂洗后，充分干燥，置于一20C备用，在一20C条件下可保 存一年.

3.1.2羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬或猴IgG异硫氰酸荧光素结合物，使用时用含0.01%~0.02%伊文思蓝PBS稀释至适当浓度.

3.1.3阳性血清

染恢复后的犬、猴血清. 用病毒抗原免疫清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通级免、犬、猴所获得的抗血清：或自然感

3.1.4阴性血清

清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清：或确认无相应病毒感染的兔、犬、猴血清.

3. 1.5 PBS(0. 01 mol/L pH7. 4)

氯化钠 氯化钾 Sg 0.2 g磷酸二氢钾 0.2 g磷酸氢二钠（NaHPO12HO) 2.83 g蒸馏水 加至1 000 mL

3.1.650%甘油PBS

甘油 5 mLPBS(0 01 mol/L pH7. 4) 5 mL

中华人民共和国国家标准

GB/T14926.51-2001

实验动物 免疫酶试验

Laboratory animalImmunoenzyme assay(IEA)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准修订了GB/T14926.18-1994（实验动物淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的免疫酶试验方法，将其作为一个独立标准列出.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：贸争鸣.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.51-2001

实验动物免疫酶试验

Laboratory animalImmunoenzyme assay( IEA)

1范围

本标准规定了免疫酶试验（IEA）所用试剂、器材和操作步骤等.

本标准适用于实验动物病毒抗体的检测.

2原理

含有病毒抗原的细胞固定于玻片上，遇相应抗体形成抗原抗体复合物，此抗原抗体复合物仍保持的反应判定结果. 其抗原活性，可与相应的第二抗体酶结合物结合，遇酶底物产生颜色反应.在普通显微镜下，根据颜色

3主要试剂与器材

3.1试剂

3.1.1抗原片

3.1.1.1抗原片的制备

将病毒接种敏感细胞（表1），待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后，用胰酶消化分散细胞，PBS洗涤三次，最后用适量PBS悬浮细胞.将细胞悬液滴于玻片孔内.同时消化不感染病毒宜.室温干燥后，冷丙酮（4C）固定10min.用蒸馏水漂洗后充分干燥，置于一20C备用. 的同批同种细胞，滴加同一玻片另一孔内，作为正常细胞对照.孔内滴加的细胞以细胞铺开、不重叠为

3.1.1.2抗原片的鉴定

每批抗原片在使用前，用相应的阳性血清和阴性血清进行鉴定.鉴定方法可用IEA或免疫荧光试验.在阴性血清与正常细胞和病毒感染细胞反应无色：阳性血清与正常细胞反应无色，面与病毒感染细胞呈棕褐色，且阳性细胞数达30%～50%时，此批抗原片可以使用.

3.1.2酶结合物

抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、免、犬或猴IgG抗体辣根过氧化物酶结合物用于检查相应动物的血清抗体.葡萄球菌蛋白A（SPA）辣根过氧化物酶结合物可代答抗小鼠、豚鼠、兔、犬和IgG抗体辣根过氧化物酶结合物使用.

3.1.3阳性血清

用病毒抗原免疫清洁或SPF级小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通级免、犬、所获得的抗血清；或自然感染恢复后的犬、猴血清.

3.1.4阴性血清

清洁或SPF级小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清；或确认无相应病毒感染的兔、犬、猴血清.

3. 1. 5 PBS(0. 01 mol/L pH7. 4)

氯化钠 8 g氯化钾 0.2 g

中华人民共和国国家标准

GB/T14926.50-2001

实验动物 酶联免疫吸附试验

Laboratory animal-Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准修订了GB/T14926.18-1994（实验动物淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的酶联免疫吸附试验方法，将其作为一个独立标准列出.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：贸争鸣.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.50-2001

实验动物酶联免疫吸附试验

Laboratory animal-Enzyme -linked immunosorbent assay(ELISA)

1范围

本标准规定了酶联免疫吸附试验（ELISA）所用试剂、器材和操作步骤等.

本标准适用于实验动物病毒抗体的检测.

包被于固相载体表面的已知抗原与待检血清中的特异性抗体结合形成免疫复合物.此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性，可与相应的第二抗体酶结合物结合.在酶的催化作用下底物发生反应，产生有 色物质，颜色反应的深浅与待检血清中所含有的特异性抗体的量成正比.

3主要试剂和器材

3.1试剂

3.1.1抗原

3.1.1.1特异性抗原

将病毒接种其敏感细胞培养增殖（表1），当细胞病变达十十十～十十时收获，冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成ELISA抗原.

3.1.1.2正常抗原

未接种病毒的相应细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液.

3.1.2酶结合物

ELISA法常用以下两类酶结合物.

3.1.2.1辣根过氧化物酶标记羊或免抗小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬或猴IgG抗体.用于检测相应动物血清抗体.

3.1.2.2辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A（SPA）.用于检测小鼠、豚鼠、免、犬和血清抗体.

3.1.3.1阳性血清

染恢复后的犬、猴血清. 用病毒抗原免疫清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通级免、犬、猴所获得的抗血清；或自然感

3.1.3.2阴性血清

清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清：或确认无相应病毒感染的兔、犬、猴血清.

3.1. 4包被液（0.05mol/LpH9.6)

碳酸钠 碳酸氢钠 1. 59 g 2.93 g蒸馏水 至 1 000 mL

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.49-2001

实验动物 空肠弯曲杆菌检测方法

Laboratory animal-Method for examination ofCampylobacterjejuni

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准规定的空肠弯曲杆菌的检测方法，非等效参照国家标准GB4789.9-1994中空肠弯曲杆菌的检测方法以及医学检验中空肠弯曲杆菌的检测方法制定而成.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口，

本标准主要起草人：范薇.

中华人民共和国国家标准

实验动物空肠弯曲杆菌检测方法

GB/T 14926.49-2001

Laboratory animalMethod for examination of Campylobacter jejuni

1范围

本标准规定了实验动物空肠弯曲杆菌的检测方法.本标准适用于猴空肠弯曲杆菌的检测.

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用面构成为本标准的条文.本标准出版时，所示版本均

为有效.标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性.

GB/T14926.42-2001实验动物细菌学检测标本采集 GB/T14926.43-2001实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂

3原理

空肠弯曲杆菌在培养基上有特定的生长、形态和生理生化特征.

4主要设备和材料

4.1厌氧罐.4.2混合气体5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气.4.3真空泵.

5培养基及试剂

5.1Cary-Blair运送培养基.5.2Skirrow琼脂平血.5.4血琼脂平血. 5.3改良Camp-BAP琼脂平m5.5TTC琼脂，5.6三糖铁琼脂.5.7克氏双糖铁琼脂. 5.8氧化酶试剂.5.9过氧化氢酶试剂.5.10甘氨酸培养基.5.11硝酸盐培养基.5.121%马尿酸钠溶，

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.48-2001

实验动物 结核分枝杆菌检测方法

Laboratory animal-Method for examination ofMycobacterium tuberculosis

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准规定了获结核分枝杆菌的检测方法.本标准特别指出了结核菌素试验复检结果的标准.本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.本标准起草单位：中国实验动物学会.本标准主要起草人：黄韧.

中华人民共和国国家标准

实验动物结核分枝杆菌检测方法

GB/T 14926.48-2001

Laboratory animal-Method for examination of

Mycobacterium tuberculosis

1范围

本标准适用于猴结核分枝杆菌的检测. 本标准规定了实验动物结核分枝杆菌的检测方法.

2引用标准

为有效，标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性. 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用面构成为本标准的条文.本标准出版时、所示版本均

GB/T14926.42-2001实验动物细菌学检测标本采集

3原理

素后注射部位的炎症反应情况，判定动物是否感染结核分枝杆菌. 结核菌素能使感染结核分枝杆菌的动物产生迟发型超敏反应.因此，可从猴上眼险皮内注射结核菌

4主要设备和材料

普通恒温培养箱

5培养基及试剂

5.1牛型提纯结核菌素（PPD）.5-2生理盐水.

6检测程序

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.47-2008代替GB/T 14926.47-2001

实验动物 志贺菌检测方法

Laboratory animal-Method for examination of Shigella spp.

中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

GB/T14926《实验动物》共54个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法， 本部分自实施之日起代替GB/T14926.47-2001《实验动物志贸菌检测方法》.本部分与GB/T14926.47-2001相比主要技术差异如下：a）对GB/T14926.47-2001《实验动物志贺菌检测方法部分内容进行了修订和增加；b）在原标准“5培养基及试剂”中增加了“5.2GN增菌液”，将原标准中"5.3S.S琼脂”修改为c）在原标准“6检测程序"中增加了“GN增菌液（36士1）C培养6h~8h”这一程序： “5.4XLD 琼脂”；d）在原标准"6检测程序”中将“S.S琼脂”修改为"XLD琼脂”：e）原标准"7.2分离培养将已接种的麦康凯琼脂和S.S琼脂平Ⅲ置（36土1）C培养18~24h.”修改为"7.2增菌分离培养将已接种的GN增菌液置（36土1)C培养6h~8h，转种麦康凯琼脂f）原标准"7.3.1菌落特征志贺菌在麦康凯和S.S琼脂平Ⅲ上形成无色透明、圆形、扁平或微凸 和XLD琼脂平Ⅲ，置（36±1)C培养18h~24h”;起，光滑湿润，边缘整齐，直径约2mm的菌落.宋内氏志贺菌菌落一般较大，半透明，有时可出现扁平，边缘不整齐的粗糙型菌落.”修改为"7.3.1菌落特征志贺菌在麦康凯琼脂平Ⅲ上形成无色、凸起、直径2mm~3mm的菌落.在XLD琼脂平Ⅲ形成红色、光滑、直径1mm~2mm的菌落，痫疾志贺氏菌1型在上述两种培养基上形成的菌落较其他志贺菌属菌落 要小”；g）原标准"7.3.5表1志贺菌生化反应”中"七叶苷脱羧酵"修改成“七叶苷”.本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口.本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草. 本部分主要起草人：黄韧.本部分所代替标准的历次版本发布情况为：-GB/T 14926 472001.

实验动物志贺菌检测方法

1范围

GB/T14926的本部分规定了实验动物志贺菌的检测方法.本部分适用于猴志贺菌的检测.

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过GB/T14926的本部分的引用而成为本部分的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分.

GB/T14926.42实验动物细菌学检测标本采集 GB/T14926.43实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂

3原理

志贺菌是革兰氏阴性短杆菌，在三糖铁或双糖铁等培养基上具有特定的生长和生化特征.因此，可通过选择性培养基培养、生化和血清试验鉴定志贺菌.

4主要设备和材料

普通恒温培养箱.

5培养基及试剂

5.1Cary-Blair运送培养基：成分及配制方法见GB/T 14926.435.2GN增菌液：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.3麦康凯琼脂：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.4XLD琼脂：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.5克氏双糖铁琼脂：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.7西蒙氏柠檬酸盐培养基：成分及配制方法见GB/T14926.43. 5.6三糖铁琼脂：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.8氨基酸脱羧酶试验培养基：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.9尿素琼脂：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.10半固体琼脂：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.11糖发酵培养基：成分及配制方法见GB/T14926.43. 5.12氰化钾生长培养基：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.13葡萄糖铵培养基：成分及配制方法见GB/T14926.43.5.14志贺菌多价诊断血清.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.44-2001

实验动物 念珠状链杆菌检测方法

Laboratory animalMethod for examination ofStreptobacillusmoniliformis

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准规定了念珠状链杆菌的检测方法.

念珠状链杆菌是人兽共患病病原菌，在我国暗齿类实验动物中已有发现并导致疾病流行，故在此增加该菌的检测方法.

本标准起草单位：中国实验动物学会，

本标准主要起草人：李红.

中华人民共和国国家标准

实验动物念珠状链杆菌检测方法

GB/T 14926.44-2001

Laboratory animalMethod for examination ofStreptobacillus moniliformis

1范围

本标准规定了实验动物念珠状链杆菌的检测方法. 本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠和地鼠念珠状链杆菌的检测.

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用面构成为本标准的条文.本标准出版时，所示版本均为有效.标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性.

GB/T14926.42-2001实验动物细菌学检测标本采集GB/T14926.43-2001实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂

3原理

念珠状链杆菌为革兰阴性多形性杆菌，主要寄居于暗齿类上呼吸道，该菌在人工培养条件下营养要求较高，故在分离培养和鉴定用培养基中均加入血液或血清.根据本菌特殊的形态、分离部位和生化反应特性可以进行分离培券和检测.

4主要设备和材料

4.1普通恒温培养箱.4.2生物显微镜.

5培养基和试剂

5.1血琼脂平Ⅲ.5.2含10%马血清的糖发酵培养基.5.3含10%马血清的肉汤培养基.

中华人民共和国国家标准

GB/T14926.43-2001

实验动物细菌学检测 染色法、培养基和试剂

Laboratory animal-Bacterioogical monitoring

Staining media and reagents

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准规定了实验动物微生物学检测的染色法、培养基和试剂.在以前的相关标准中对染色法、培养基和试剂的具体内容没有进行描述，基本上是引用GB4789.4-1994食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》、GB4789.10-1994（食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、GB4789.11-1994法、培养基和试剂》中相关内容，给本标准的使用造成不便.为将染色法、培养基和试剂的配制方法和操作程序标准化并便于查找，特制定本标准.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：李红、黄韧、范藏.

中华人民共和国国家标准

实验动物细菌学检测 染色法、培养基和试剂

GB/T 14926. 43-2001

Laboratory animalBacteriological monitoringStaining media and reagents

1范围

本标准规定了各种染色法、培养基和试剂.本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、免、犬、的细菌学检测.

2原理

实验动物微生物从培养基中摄取营养物质，维持正常的生长繁殖和代谢，其所含细胞物质能与各种染料结合，呈现不同颜色.

3染色液的配制和染色法

3.1革兰染色法

3.1.1结品紫染色液

结晶紫 1 g2%S6 1%草酸铵水溶液 20 mL 80 mL

将结晶紫在乳体内研磨，用乙醇溶解，加入草酸铵水溶液混合，即可使用.

3.1.2碘液

1g2g

化钾 蒸馏水 300 mL

将碘化钾与碘先用少量水溶解，待全部溶解后，加蒸馏水至300ml.

3.1.3脱色液

2%S6

3.1.4沙黄（番红）复染液

沙黄 0. 25 g95%乙醇 10 mL蒸馏水 90 mL将沙黄在乳钵内研磨，用乙醇溶解，加人蒸馏水混合，即可使用.

3.1.5染色法

3.1.5.1涂片风干后在火焰上固定，

3.1.5.2滴加结晶紫染色液，染色1min，流水冲洗，甩干.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.42-2001

实验动物 细菌学检测 标本采集

Laboratory animal-Bacteriological monitoring-Collection of specimens

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准规定了实验动物细菌学检测标本的采集法.

检测标本的采集是实验动物微生物学检测项目共有的程序，也是极为重要的环节之一.在原标准中，采样方法分列在每个细菌检测方法的标准中，步骤描述不详细.为了将采样程序标准化并便于查找，特制定本标准.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：李红、贸争鸣、范薇.

中华人民共和国国家标准

实验动物细菌学检测标本采集

GB/T 14926.42-2001

Laboratory animal-Bacteriological monitoringCollection of specimens

1范围

本标准规定了实验动物细菌学检测标本的采集法. 本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬和猴的细菌学检测.

2原理

实验动物微生物在特定部位定植，采取相应部位的标本，可达到最大的检出率.

3主要设备和材料

3.1小动物解剖固定板（蜡板或木板）.3.2各种型号手术剪、手术摄子、止血钳.3.3小动物麻醉缸. 3.4二氧化碳麻醉装置.3.5酒精灯.3.6接种棒及接种针.3.775%乙醇. 3.8乙.3.9注射器及针头.

4采样方法

使用乙醚或二氧化碳麻醉.

4.2皮肤采样

待检部位用75%乙醇液消毒后，用灭菌接种刀、镊刮取待检动物皮毛、鳞肩少许.用于皮肤病原真菌的直接涂片检查和分离培养.

4.3血清采样

4.3.1眼眶后静脉丛取血

动物麻醉后，用左手拇指和食指抓住两耳之间的头部皮肤，使头部固定、眼球充分外突，眶后静脉丛充血.右手持玻璃毛细取血管（内涂抗凝剂）.与面部成45的夹角，经眼脸和眼球之间刺入眼球后部的静脉丛.血液自动流入取血管.当得到所需要的血量后，将毛细取血管拔出，同时松开左手，毛细取血管离心后，获得实验所需要的血清.

此采血法适合小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠的血清采集.

4.3.2眶动脉或眶静脉取血

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.41-2001代替GB/T14926.41-1994

实验动物 无菌动物生活环境 及粪便标本的检测方法

Laboratory animal-Method for examination ofenvironment and faecesof GF animals

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准是对GB/T14926-41-1994（无特定病原体动物、无菌动物生活环境及粪便标本的检验方

法》的修订.

本标准删除了GB/T14926，41-1994中对无特定病原体动物生活环境及类便标本的检验，保留无菌动物生活环境及粪便标本的检测并作了如下修改：增加了硫乙醇酸钠培养基在使用前需煮沸驱氧程序；在从液体培养基转种血琼脂平Ⅲ时增加涂片染色镜检，以防止在转种时因死亡细菌不能在血平Ⅲ上 生长而漏检.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：李红.

本标准于1994年1月首次发布.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.41-2001代巷GB/T 14926.41-1994

实验动物无菌动物生活环境 及粪便标本的检测方法

Laboratory animalMethod for examination ofenvironment and faeces of GF animals

1范围

本标准规定了无菌动物生活环境及粪便标本中细菌的检测方法. 本标准适用于无菌小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔的微生物检测.

2引用标准

为有效，标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性. 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用面构成为本标准的条文.本标准出版时，所示版本均

GB/T14926.43-2001实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂

3原理

温度和培养环境可以对污染菌进行检测. 污染无菌动物的微生物主要是细菌（需氧菌和厌氧菌）和真菌，所以通过不同的培养基、不同的培养

4主要设备和材料

4.2生化培养箱. 4.1普通恒湿培养箱.4.3水平流洁净工作台.4.4恒温水浴箱.

5培养基及试剂

5.1脑心浸液肉汤.5.2硫乙酵酸钠肉汤.5.3大豆蛋白陈肉汤.5.4血琼脂平血.5.5无菌生理盐水.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.32-2001代替GB/T14926.32-1994

实验动物

大鼠冠状病毒/延泪腺炎病毒检测方法

Laboratory animal-Method for examination ofrat corona virus(RCV）/sialodacryoadenitis virus (SDAV)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准是对GR/T14926.32-1994（实验动物大鼠冠状病毒/延润腺炎病毒检测方法》的修订.由于大鼠冠状病毒和延泪腺炎病毒与小鼠肝炎病毒有交叉抗原，因面删除原标准中4.1玻片抗原的制备方法，增加了3.1.2的抗原片制备方法.

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.本标准起草单位：中国实验动物学会.本标准主要起草人：贺争鸣. 本标准于1994年1月首次发布.

中华人民共和国国家标准

实验动物 大鼠冠状病毒/延泪腺炎病毒检测方法

GB/T 14926.32-2001代静GB/T 14926.32-1994

Laboratory animalMethod for examination ofrat corona virus(RCV)/sialodacryoadenitis virus (SDAV)

1主题内容与适用范围

本标准规定了大鼠冠状病毒/延泪腺炎病毒（RCV/SDAV）的检测方法、试剂等.本标准适用于大鼠RCV/SDAV的检测.

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用面构成为本标准的条文，本标准出版时，所示版本均为有效.标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性.

GB/T14926.51-2001实验动物免疫酶试验 GB/T14926.50-2001实验动物酶联免疫吸附试验GB/T14926.52-2001实验动物免疫荧光试验

3原理

小鼠肝炎病毒（MHV）与RCV/SDAV有密切的抗原关系，根据免疫学原理，采用MHV抗原检测大鼠血清中RCV/SDAV抗体.

4主要试剂和器材

4.1试剂

4.1.1.1特异性抗原

用MHV感染DBT或L929细胞，当病变达~时收获，冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细瓶碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成EIISA抗原.

4.1.1.2正常抗原

DBT或L929细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片面获得的上清液.

4.1.2抗原片

MHV接种DBT或L.929细胞1~2d后，病变达~时用胰酶消化分散.PBS洗涤，涂片.室温干燥后，冷丙酮固定10min，一20C保存.

4.1.3阳性血清

MHV抗原免疫SPF大鼠所获得的抗血清.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.31-2001代替GB/T 14926.311994

实验动物

大鼠细小病毒（KRV和H-1株）检测方法

Laboratory animalMethod for examination ofrat parvovirus（KRVand H-1strain)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 旱

订.增加了检测抗体的腾联免疫吸附试验. 本标准是对GB/T14926.31-1994《实验动物大鼠细小病毒（KRV和H-1株）检验方法》的修本标准由中华人民共和国科学技术部提出井归口.本标准起草单位：中国实验动物学会.本标准主要起草人：贺争鸣.本标准于1994年1月首次发布.

中华人民共和国国家标准

实验动物 大鼠细小病毒（KRV和H-1株）检测方法

Laboratory animal-Method for examination ofrat parvovirus (KRV and H-1 strain)

1范围

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用面构成为本标准的条文.本标准出版时，所示版本均为有效，标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性.

GB/T14926.50-2001实验动物酶联免疫吸附试验 GB/T14926.51-2001实验动物免疫酵试验GB/T14926.52-2001实验动物免疫荧光试验GB/T14926.54-2001实验动物血凝抑制试验

3原理

株）抗体；或根据大鼠细小病毒（KRV和H-1株）在一定的条件下，能集豚鼠红细胞，这种凝集红细胞 根据免疫学原理，采用大鼠细小病毒（KRV和H-1株）抗原检测大鼠血清中细小病毒（KRV和H-1的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测大鼠血清中细小病毒（KRV和H-1株）抗体.

4主要试剂和器材

4.1试剂 4.1.1ELISA 抗原4.1.1.1特异性抗原

用大鼠细小病毒（KRV和H-1株）感染大鼠胚细胞，培养7~12d，当病变达~十时，收获培养物.冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成ELISA 抗原.

4.1.1.2正常抗原

大鼠胚细胞冻融破碎后经低速离心去除细胞辞片面获得的上清液.

4.1.2血凝素

大鼠细小病毒（KRV和H-1株）分别接种大鼠胚细胞，培养7~12d.当病变达~时收获.冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液分装后低温保存.

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.30-2001代替GB/T 14926.30-1994

实验动物 兔轮状病毒检测方法

Laboratory animalMethod for examination ofrabbit rotavirus (RRV)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

动，对原标准有关内容的描述作了修改. 本标准是对GB/T14926.30-1994《实验动物免轮状病毒检验方法3的修订.检测方法未作改

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：贺争鸣.

本标准于1994年1月首次发布.

中华人民共和国国家标准

实验动物 兔轮状病毒检测方法

GB/T 14926-30-2001代兼 GB/T 14926. 30-1994

Laboratory animalMethod for examination ofrabbit rotavirus (RRV)

1范围

本标准规定了兔轮状病毒（RRV）的检测方法、试剂等.本标准适用于兔RRV的检测.

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用面构成为本标准的条文.本标准出版时，所示版本均为有效.标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性.

GB/T14926.50-2001实验动物酶联免疫吸附试验 GB/T14926.51-2001实验动物免疫酶试验GB/T14926.52-2001实验动物免疫荧光试验

3原理

原检测兔血清中RRV抗体. 联轮状病毒（SA11株）与RRV有密切的抗原关系，根据免疫学原理，采用轮状病毒（SA11株）抗

4主要试剂和器材

4.1试剂4.1.1ELISA抗原4.1.1.1特异性抗原

用猴轮状病毒（SA11株）接种MA-104细胞接种后2~3d，病变达~十时收获.冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓增后制成ELISA抗原.

MA-104细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片面获得的上清液.

4.1.2抗原片

猴轮状病毒（SA11株）感染MA-104细胞接种后2~3d.病变达~时用胰酶消化分散，PBS洗涤，涂片，室温干燥后，冷丙酮固定10min，一20C保存.

4.1.3阳性血清

获轮状病毒（SA11株）抗原免疫免所获得的抗血清：或自然感染恢复后的兔血清.4.1.4阴性血清

中华人民共和国国家标准

GB/T 14926.29-2001代替GB/T 14926.291994

实验动物 多瘤病毒检测方法

Laboratory animal-Method for examination ofpolyoma virus(POLY)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前 旱

动，仅对原标准的个别文字作了修改. 本标准是对GB/T14926.29-1994（实验动物多瘤病毒检验方法》的修订.对检测方法未作改

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口，

本标准起草单位：中国实验动物学会.

本标准主要起草人：届霞琴.

本标准于1994年1月首次发布.

中华人民共和国国家标准

实验动物 多瘤病毒检测方法

GB/T 14926.292001代# GB/T 14926. 29-1994

Laboratory animalMethod for examination ofpolyoma virus (POLY)

1范围

本标准规定了小鼠多瘤病毒（POI.Y）的检测方法和试剂等.本标准适用于小鼠POLY的检测.

2引用标准

为有效.标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性. 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用面构成为本标准的条文.本标准出版时，所示版本均

GB/T14926.50-2001实验动物酶联免疫吸附试验GB/T14926.51-2001实验动物免疫酶试验GB/T14926.52-2001实验动物免疫荧光试验

3原理

根据免疫学原理，采用POLY抗原检测小鼠血清中POLY抗体.

4主要试剂和器材

4.1试剂：4.1.1ELISA抗原4.1.1.1特异性抗原

~收获.冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成ELISA抗原.

4-1.1.2正常抗原

ME或3T3细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞醉片而获得的上清液、

4.1.2抗原片：POLY接种ME细胞，培养10~12d，病变达~时用胰酶消化分散，PBS洗涤，涂片.室湿干燥后，冷丙酮固定10min，-20C保存.

4.1.3阳性血清

POLY抗原免疫SPF小鼠所获得的抗血清.