NY
中华人民共和国农业行业标准
代替NY/T548-2015
NY/T548-2025
猪传染性胃肠炎诊断技术
Diagnostic techniques for porcine transmissible gastroenteritis
前言
起草.
本文件代替NY/T548-2015（猪传染性胃肠炎诊断技术》，与NY/T548-2015相比，除结构调整和
编辑性改动外，主要技术变化如下：
b）增加了间接免疫荧光法（见第10章）；c）增加了实时荧光反转录-聚合酶链式反应（见第13章）； d）删除了血清中和试验中的常量法（见2015年版的6.6.4.2）；e）更改了间接酶链免疫吸附试验（见第15章，2015年版的6.7）：f）增加了综合判定（见第16章）.
a）增加了样品采集与处理（见第7章）；
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
猪传染性胃肠炎诊断技术
1范围
本文件规定了猪传染性胃肠炎的临床诊断、样品采集与处理和实验室诊断方法的技术要求.本文件适用于猪传染性胃肠炎的诊断、监测.
2规范性引用文件
文件.
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本
GB19489实验室生物安全通用要求
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4缩略语
下列缩略语适用于本文件.CPE：细胞病变作用（Cytopathic effect)DIFA：直接免疫荧光法（Direet immunofluorescence assay） DAP1:4′，6-基-2-苯基吲噪(4′，6-diamidino-2-phenylindole)ELISA;酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay)FA:荧光抗体（FITC-labeled antibody)FITC：异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate）IDIFA：间接免疫荧光法（Indireet immunofluorescence assay) PBS:磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered saline)PRCV：猪呼吸道冠状病毒（Porcine respiratory coronavirus)Real-time RT-PCR：荧光定量反转录-聚合酶链式反应（Real-time reverse transcription-polymerasechain reaction)RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction) TGE:猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis)TGEV：猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus)
5临床诊断
5.1流行病学
5.1.1TGE一年四季均可发生，一般多发生在冬季和春季.5.1.2TGE潜伏期较短，通常为18h~3d.传播迅速，2d~3d可波及整个猪群.5.1.3TGE有暴发流行、地方流行和周期性地方流行3种形式.5.1.4若感染了TGEV变异株PRCV，则会出现不同的流行模式，从而使TGE的流行更加复杂化.5.1.5各种年龄的猪均可感染尤其是10日龄以内的哺乳仔猪，发病率和死亡率可高达100%.5.1.6病猪、带毒猪和隐性感染猪是本病的主要传染源.5.1.7病毒通过粪-口途径、气溶胶或感染母猪的乳汁进行传播.
NY/T 548-2025
5.2临床症状
5.2.1新生仔猪表现为呕吐、水样腹泻、脱水、体重迅速下降，腹泻严重的仔猪，呕吐物中常出现未消化的乳凝块，粪便臭，病程短，症状出现后2d~7d死亡.5.2.23周龄仔猪、生长期猪和出栏期猪感染时仅表现厌食，腹泻程度较轻，持续期相对较短，偶尔伴有 呕吐，极少发生死亡.5.2.3泌乳母猪发病则一过性体温升高、呕吐、腹泻、厌食、无乳或泌乳量急剧减少.
5.3病理变化
5.3.1肉眼可见的病理变化常局限于消化道，特别是胃和小肠.胃膨胀，胃内充满凝乳块，胃黏膜充血或出血胃大弯部黏膜激血.小肠壁弛缓、膨满，肠壁菲薄呈半透明.小肠内容物呈黄色、透明泡沫状的液5.3.2组织学变化主要以空肠为主，从胃至直肠呈广范围的渗出性卡他性炎症变化.其特征是肠绒毛萎 体，含有凝乳块，哺乳仔猪肠系膜淋巴管的乳糜管消失.缩变短（见附录A中的图A.1），回肠变化稍轻微，小肠变化有较明显的年龄特征，新生猪变化严重.5.3.3电子显微镜观察，可见小肠上皮细胞的微绒毛、线粒体、内质网以及其他细胞质内的成分变性.在
细胞质空泡内有病毒粒子存在，
5.4结果判定
便、小肠及其内容物进行实验室诊断. 符合5.1且满足5.2或5.3的病例，可判为TGE疑似病例.确诊应采集有典型临床症状猪只的粪
6生物安全措施
进行猪传染性胃肠炎的诊断、检测时如动物剖检、样品采集与处理、核酸处理等，按照GB19489的规定执行.
7样品采集与处理
7.1仪器设备
7.1.1手术刀、剪刀和镊子.7.1.2微量移液器及配套吸头.7.1.4组织匀浆器. 7.1.3振荡器.7.1.5台式低湿高速离心机.7.1.6冰箱（-20℃）.
7.2.10.02mol/LpH 7.2磷酸盐缓冲液（PBS)，配制方法按照附录B中B.1的规定执行.7.2.2青霉素（100000IU/L).7.2.3链霉素（100 000 μg/L).7.2.4医用防护服.7.2.6离心管（2ml、15mL.、50mL) 7.2.5样品保存管（2mL、25mL50mL）.
7.3.1粪便
选取临床症状典型的发病猪只，用灭菌注射器吸取其粪便1mL～2mL或轻轻挤压发病猪的腹部，从其肛门处采集1mL~2mL粪便，故人含等体积无菌PBS（含终浓度1000 IU/mL青霉素、1000μg/mL链霉素）的样品保存管中，一20C保存.
