中华人民共和国国家标准
GB 23200.105-2016
食品安全国家标准 肉及肉制品中甲萘威残留量的测定 液相色谱-柱后衍生荧光检测法
National food safety standards-
Determination of carbaryl residue in meat and meat products
HPLC-fluoresce detector with post column derivation
中华人民共和国农业部 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局
前言
光检测法》. 本标准代替SN/T0122-2011《进出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验方法液相色谱-柱后衍生荧
本标准与SN/T0122-2011相比，主要变化如下：一标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式：一标准范围中增加“其它食品可参照执行”. 本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN :SN/T .
食品安全国家标准
肉及肉制品中甲萘威残留量的测定
液相色谱-柱后衍生荧光检测法
1范围
本标准规定了进出口肉及肉制品中甲萘威残留量的液相色谱-柱后衍生荧光检测法.本标准适用于进出口牛肉、鸡肉、虾肉、鱼肉及火腿罐头中甲萘威残留量的测定，其它食品可参照执行.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB2763-2014食品安全国家标准食品中农药最大残留限量
GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法
3原理
分离，经柱后衍生后，用荧光检测器检测，外标法定量. 用丙酮-石油醚混合溶液提取样品中的甲萘威残留物，经凝胶层析柱净化后，浓缩，高效液相色谱
4试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682中规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙晴（CHCN）：色谱纯.4.1.2乙酸乙酯（CHO）：色谱纯.4.1.3环已烷（CgH）：色谱纯.4.1.4丙酮（CHCOCH）：色谱纯. 4.1.5石油醚：沸程30℃~60℃.4.1.6无水硫酸钠（NazSOa）：650C灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用.4.1.7氯化钠（NaC1）.4.1.9邻苯二甲醛（C HO ，O-Phthaladehyde OPA）. 4.1.8柱后衍生试剂.4.1.10巯基乙醇（CH0S，Thiofluor）.
4.2溶液配制
4.2.1Na0H溶液（0.2%，m/v）：取2gNa0H，以水定容至1000ml.4.2.2邻苯二甲醛稀释液：硼砂溶液（0.4%，m/v）. 4.2.3邻苯二甲醛试液：溶剂储罐中注入945ml0PA稀释剂，用悄性气体（氮气）吹扫至少10min，100mgOPA固体溶解于约10mlL的色谱纯甲醇中，将OPA溶液加入除氧的OPA稀释剂中，溶解2g疏基乙醇固体于5mLOPA稀释剂中，加入到储罐中，盖上瓶盖，打开气流，再不断的吹扫几分钟，关闭排气阀，轻轻地搅动溶剂以使其完全混合. 4.2.4乙酸乙酯-环已烷混合溶液（11 v/v）：取100mL乙酸乙酯，加入100mL环己烷，摇匀备用.
4.3标准品
4.3.1甲茶威：分子式C12H11N02，CAS63-25-2，纯度>99.5%.
4.4标准溶液配制
4.4.1甲萘威标准储备液：准确称取适量的甲奈威标准品，以乙晴溶解，4C冰箱保存，有效期为6个月.保存于4℃冰箱内.4.4.2甲萘威标准工作液：取一定量的标准储备液，用乙晴稀释至适当浓度，4C冰箱保存，有效期为1周.保存于4C冰箱内.
4.5材料
4.5.10.45μm尼龙滤膜.
5仪器和设备
5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g. 5.1液相色谱仪：配有荧光检测器和柱后衍生单元.5.3全自动凝胶色谱仪（配有馏分收集浓缩器）.5.4旋转蒸发装置.5.5氮吹仪.5.6组织匀浆机. 5.7振荡器.
6试样制备与保存
6.1试样制备
6.1.1肉
将所取全部样品，充分搅碎混匀，取有代表性的样品，总量不少于500g，装入清洁容器内，密封并标明标记.
6.1.2罐头
密封并标明标记. 将所取全部样品整罐倒出，充分搅碎混匀，取有代表性的样品，总量不少于500g，装入清洁容器注：以上样品取样部位按GB2763附录A执行.
6.2试样保存
试样应于-18℃以下保存.在抽样和制样的操作中，应防止样品受到污染或发生含量的变化，以保证实验样品能代表总体样本.
7分析步骤
7.1提取
称取试样20g（精确到0.01g），于100mL具塞三角瓶中，加水6mlL（视样品水分含量加水使总水量约20g，肉通常在70%左右，加水6mlL），加40mlL丙酮，匀浆1min，加氯化钠6g，充分摇匀， 再加30mL石油醚，振摇30min.取35mL有机层上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL，加2mL乙酸乙酯-环已烷溶液再浓缩，如此重复3次.乙酸乙酯-环已烷定容为5ml，0.45um滤膜过滤，待净化.
7.2凝胶色谱（GPC）净化
7.2.1凝胶色谱净化参考条件
a）净化柱：400mmX30mm，BioBeadsS-X3 或相当者. b）流动相：乙酸乙酯-环已烷.
c）流速：5.0ml/min.d）样品定量环：5ml.e）馏分收集段：10.0min~15.0min.f）净化柱平衡时间：5min.
7.2.2凝胶色谱浓缩参考条件
a）样品浓缩条件见表1.b）浓缩终点判定：液位传感模式. c）溶剂替换：2mlL乙晴，重复两次.d）定容体积：1ml.
7.2.3凝胶色谱净化步骤
将5ml待净化液按7.2.1和7.2.2规定的条件进行净化与浓缩，最后得到1mL净化液待测定.
表1馏分浓缩条件
浓缩时间段 浓缩杯区域 温度（℃） 真空度（Torr）1区 50 280样品浓缩过程 2区 52 2203区 54 2101区 52 220浓缩终点到达过程 2区 53 220
7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：C，250mmX4.6mm×5um，或相当者；b）柱温：42C;c）荧光检测器：入330nm，入_465nm：d）流动相：乙晴水（4060，体积比）：e)流速：1.0mL/min;
f）进样量：20L.
7.3.2柱后衍生
a）衍生试剂1：水解试剂，0.4%的氢氧化钠溶液，流速0.4mL/min；b）衍生试剂2:0PA试剂，流速0.4mL/min:c）反应器温度：水解温度为100℃，衍生温度为室温.
7.3.3色谱测定
根据样液中被测甲萘威的含量情况，选定浓度相近的标准工作液，其响应值应在方法检测的线性范围内.在上述液相色谱条件下，甲萘威保留时间为11.1min，色谱图见附录A中的图A.1.
7.3.4空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行.
8结果计算和表述
