中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1199-2003

棉花中转基因成分定性PCR 检测方法

Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified ponents in cotton

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本称准的附录人为资料性附录.本标准由国家认证认可流督管理委员会提出并日口. 本标准起车单位：中毕人民共和国天律出人碳检验检疫局.本标准主要起草人，部文类、期府、唐行寿、杨蹈勇、何靠， 本标准系首改发布的检验检疫行业标准，

棉花中转基因成分定性PCR 检测方法

本标准配定了抗膜组目民典编花转基四成分的定性PCR独到方造.

本标准适用于抗鳞组目昆或据花SGK321 SGK9708 GK1.GK2、GK3 GK5 GK12 GK19 GK22、GK95-1（晋桃26号）、Bolgsrd（保特棉）中转基因成分的定性PCR检测.

2规施他引用文件

的修改单（不包猫款误的内容）或够订新均不适用于本标准，然面，脱助根整本标车达成持议的备方蛋究 下列文件中的条款通过本样准的引用到成为本标准的条款，凡往明日期的积用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本，凡是不性日期的引用文件，其最新斯本适用于本标准，

G8/T6582分析实验室用水规椎板实验万然SN/T113基四分折检测实验室技术要求 SN/T11H推物及其产品转基四武分检测换科和制样方编SN/T1204植物及其加工产品中转基因底分实时费光PCR定性验验方位

3本、定文和细略语

下列水语，定文和增略添通河于本标准，

3. 1

荟因tmg

行表达，以便证物种获得新的品种特征. 将物种本身不具有的、来据于其他物种的验据DNA序列，通过各种导人手级，使其在谈物种中进

3. 2

联合路组式反应polymurse chais reactlo (PCR)

计的用条引物分别与模反DNA两条证上相应的一段互补序列发生退火面相互继合，授看在DNA重合 核板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA账合障作用和活宜的反应条件下：板据板序列设的作用下以四种脱氧核糖核（NTP）为底物笑引物得以能件，些后不新宣置变性、通火和延神达一提琴，使款扩理的基国片积以儿何价数矿增，

3.3路备

3.3.1PCR.polymerase chin reactio.R合国链式反度，院称PCR 3.3.2DNA，deoxymbenucleic acid.脱氧技糖披酸.3.3.3dNTP，deoxyrionutleoide trighospha，氧俄苷三确貌 3. 3. 4dATP;deoxyedenoaine triphospbate B氧腺管三确能 3.3.5dCTPdeoxyeytidine triphosphate.鼠氧脂节三确酸. 3.3.6dGTPdeoxyguaosine triphosphate-服氧乌甘三调股.3.3. 7dTTP deoxythymidine triphorphate.服氧胸甘三确股.

SN/T

3. 3. 15NPT1l neomgcin3-phosphotrsssferese gene-新部案-3'-确能转移期基器

3.3.16NOS.terminanor of nogiine symthast gene，原孩合成签因路止子.

3. 3. 17 CrylA(b)-Cry IA (c) e synthetic gene encodes 608 ansino acida inaectisidal-artivu trunated produet identical to thet of crylA(b) gete and eryIA(c?) gene ef Becifles dkaringiexrir ss/ap.Rarnta*stnHD-1aodHD-13苏云金芽的杆菌杀盘毒强白oryfA（a）和cryA（r）的合成基图.

3. 3. 18 CrylA(c? e synthetic gene encodes insectieidalb-ative truncated product idantical to that ofcryIAGc)gene of Bocius thuringieni subsg-Krmai steain HD-7a 苏装金茅拍杆图条点事驱自crylA(e）的合成基因.

3.3.19GUS.beta-gocuronidase gent3-能期甘R国基因.

3.3.2918S rDNA 18S rihosomal DNA gene.18S 核糖体 DNA 基因

4防污染措施

推测过程中防止交叉行染的施检黑SN/T1193中的规定执行.

5抽祥和制标

5.1取样

拨照SN/T1194中规宠的方法执行.

5.2样

取约19g棉花群品，在经121℃.30min高医价事处理过的研体中加人板氮快速研需至特品析末联教约0.5mm大小，快遇人1.5nL的高心管中，于一2保存.

6测定方法

6.1慕堰

特异性扩添外原差因的DNA元斯，服福PCR扩增结果，判新波祥品中是否含有转基因成分.

6.2试到和料

6.2.1引物根表1的序列迷行引物合成.加水配制成100μ=oi/L.储存，直垫用于PCR到试的引物 除分有能定外，其他试前为分析纯或生化试所，水为股照GB/丁4682规定的一级水.堆度为5pml/L..其中外国属因的有关偏息参见附录A，

表1检测转基因精花内、外源基因的引物序列

5'-ttgr-trorwt-irphggr? 引物序月185 eDNA 内 5'rtgcgprgeerroet? 5'-gcet-aatgosic}' 137 54CaV 368 外源 5'-prgtstratrgy-tper-? 195 54

1(值)

被验测著 5'gerter-sggrrgr-urg- 引物列 扩理片股长展/bp 通火度/NOS 外源 5'rtcr-tagmgrgpt-} 5'-rrgrgre 180 54GUS 5'-mrag-oggtsorr3’ 210 04IIL4N 外 5'-wgugat-anmrnggrgargr? 1$$ 4CrylA(b)- CyfA(e) 5'p-peoear-goger! 216 54CrylA(e) 外 5°-g-(ea-g--g--tc0- 5'-00-(--1-(1-0-0 119 6)

6.2.21mol/LTris-HC1级冲液（pHs.0)，称取121.1g三起甲基氨基甲烧（Tris)，治于800mL水 中，提件.加人维酸4Zm1.冷句至室，用特盐酸准确调节pH至6.0.加水定容至1L.分装后高压灭图备用，

6.2.30.5mo/LEDTA（pH8.0）.在800ml.水中加人186.1g二水乙二股四乙酸二纳（Na-EDTA2HO).用磁力提拌基新烈现拌-用机化销调节液pH值至8.0（约需20g氢化钠 腔）.后加水定容至1L，分装后高压灭菌备用，

6.2.4DNA抽提级冲液，量数100mL 1 mol/LTris-盐股.50mL0.5mol/LEDTA.称章20.0十六 烧基三甲基膜化胶（CTAB） 81.816g氢化钠.20g聚乙姆略烧酮-40（PVP-40）.加水解至1L，分装后高压灭菌备用，

6.2.5CTAB现院威：称取5.0gCTAB.2.3376g黑化销.加水指解定容至1L.分装后商压灭菌 备用.

6.2.61.2mcl/1.氢化纳落痕：格取70.128g化.加水解定物至1L.分服后商压天菌备用

6.2.7Tr和册.

6.2.8三甲统，

6.2.9被氮.

6.2.10外丙，

6.2.1170%乙B.

6. 2. 12 TE 冲 鹿(pH8.0) 量取 30 mL 1 mol/L Triv-HCI(pH8.0)和 2 mL 0. 5 mol/L EDTA （pH8.0），加水定容至1L，分联后高压买离备用.

既化键（MgC) 0.1%明胶.

6.2.1410×氧化锁:25 mmol/L

6. 2. 1510XdNTPs 含 4ATP.d4TTP dCTP eGTP 各 2. 5 mmol/L

6. 2. 16 7ey B 5 U/pl

6. 2. 17 RNaseA 10 =g/mL

6.2. 18模化乙键 10 mg/mL

6.2.19DNA分子量排记物50 bp~800bp.

6.2.20琼，

6.2.2150×TAE级冲浆B取48Mg Tris.量取114.2 mL冰乙M.200mL0.5mol/LEDTA （pHL0），于水中，北容至2L、分款后高压灭备用.

SN

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1198-2003

马铃薯中转基因成分定性PCR检测方法

Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified ponents in potatoes

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局

前言

本标准由国家认至认可监督管理委员会费出并日口， 本标准的附录A为资科性附录本标雅起草单位：中华人民共和国山东出人院检验检疫局， 本标准主要起手人，高宏停、梁成球、作艺兵、权油题，本标准系首次发布的检验检疫行业标准.

马铃薯中转基因威分定性PCR检测方法

1范

本标准规定了马特薯中的转基因成分的定性PCR检测方涨，

本标准适用于转基国马铃暮品种 （NEW LEAF) POTATO LINES BT-06 ATBT 04-06 ATBT 04-31. ATBT 04-36 AND SP8T C2-05; (NEW LEAF* PLUS) POTATO LINES PBMT 21-129 PBMT 31-350 AND PBMT 22-82 (NEW 1 EAF® Y)POTATO LINES RBMT 15-101 SEMT15-02ANDSE3T15-15等品种的转基器马特暑块蒸.植标、生暑条，生著片、淀粉的检测.

2览性到用文神

下列文件中的条款通过本标难的引用百或为本标难的条款.凡是注日期的引用文件.其随后的修我单（不包括助误的内容）或修订断均不造用于本标座，然真，致助根器本标理达成协以时各方研究 是否可使用这些文件的最新版本，凡是不往日期的引用文件，其最新本适用于本都准.

GB/T6682分折实验室用水规特和实验方然 SN/T1193基器检验实验室技术要求SN/T1194物及其产品转基因成分检测抽样和制样方实 SN/T1294桂物及其加工产品转基因式分实时费光PCR定性检验方法

3水谱、飞文和地降通

下列水选福定文（理略香）造用于平标雀.

3 1

特基因transgre

行表适以使或物种在得联的品护特证.

聚合路式反应pelymrs chala reactn.PCR

计的丙条引物分别与镇板DNA商条装上相店的一政互补序孔发生道火面相互地合，楼靠在DNA聚合 板基因序列先经高盈变性成为单链，在DNA家合期作用和适宜的反应条件下，根强模版序列论腾的作用下以固种脱氧模糖额载（dNTP）为底物，使引物得以冠带-然应不断重复交性，退火和运师达 一提坏，使款扩增的基器片题以几付倍数扩增.

3.3财增

3.3.1Pau马铃薯种属特需始DNA引物，扩增的片级为马价著决蒸C藏蛋白Patatin高因片我.

3.3.4NOS nopaline synthese terminator.别脂碱合成骗3*特录婷止于.

3. 3.5PVYep:potato Y vires coat protein.马神著 Y 病毒外克蛋白.

3. 3.6 cry 3A -个曲 B rharingiresis subep.Tenrbriamis (B. L 1 ) strain BI 256-B2 的董白 这个面 白具有抗虫措位，尤其是可以选择性的染死料罗控多马件署甲业（Coloadopoutobeetie larvet）.

3. 3. 7 CP4 EPSPS S-enolpyrulshlimate-3-ghosphete synthase 5-enolpyrul shikimete-3-phosphatesytae，来露于农杆离Agrecterimsp.SunCP4的5-弄章酸-3-确狼合成.

3.3.8PLRVreppottoleafrollvirus.马要@叶病毒重复序所，

3. 3.9 E93°:the 3′ non-translated region of the pea ribulose-1 5-bisphosphate cerbexylase small

3. 3. 10 ArsbSSU1A;arabidopsis thaliasa ribuloae-1 ′ 5-biapboaphate carboxylase (Rubisco) amall sobunit ats 1A prometer srsifopsis thaiana 的核附增-1，5-二确股般化册小亚著 1A的脂动于.

著器. 3.3.11aads（resides outsideT-DNA)在转座自大斯杆澳T=7中编码链每素服背斯（著）转琴腾的

3.3. 12oriV （residrs outside T-DNA)个医自农杆图Agrobacterium时 RK2 黑粒的1.3 kb 的复制 区城.

3.3.13ori 322，（residesoutside T-DNA）一个提自pBR322股松的 1.8kb的片级，其中包含复制区域和转够继合位点bom.

3.3. 14FMV 35S* promotor derived from Fgwort momait viru (FMV) 鲁E时病毒 35S 启子

4污染指

检图过程中防止变又污象的指连烈SN/T1193中的规定执行.

5的杆与制称

对于转基因样品通用的推排方法-教预5N/T1194的规定类行.

5.1马转著产品抽精量

5.1.1马餐薯块蒸、生薯条、生薯片、株抽呼量.

按期表1中比例的种，其中每包取样数的单位对于换基，生著条，生等片为个，对于植核为株.

表1马价著块案、植殊、生膏杂的抽祥量

量/包 2 251506 3 3501~35 000 ≥15 t01 5 5 6

5.1.2马价著院粉排样量.

按表2中出例抽样.

表2马转要淀验的抽特量

开包教H 邮包取样数目/051~15 1460 ≤15 2 3 5 120 120 120501~3 200 1$1-500 13 120 12035 001 ~560 000 3 201~35 000 20 12 120 100≥500 001 50 120

5.2马付要试样制备

5.2.1马转塞块茎、生著条、生著片、植的试标制备

对于间一截次的马价薯换多、生要条、生要片，把每个样品院干净，在任意都位用小刀付下约1cm的样品作为试磷用于提取DNA.

对于属一独次的马待幕植费，章每个样品的一片时斤洗干净，用小刀帽下2co的叶元作为试祥用于提取DNA

5.2.2马铃要定粉试祥的制备

把每包祥的120g院粉充分现合.从每个120g中取100mg作为试样，

6润定方法

6.1照理

特异性扩增外基因的DNA开新，服据PCR扩增结果.列新饮所品中是否先有然固成分 品经过员案DNA后，针对特基因植物所雅人的外罪基四的基因序列设计引物，通过PCR技术，

6.2试别和树料

6.2.1引物：拨预表3中换供的引物序判合成引物，加人无离子水配成100pmol/p1.把存，配成直续用于PCR反应的20mol/L的工作流，见属录A.

除另有规定外，其继试剂为分析此减生化试到，水为族用GB/T6682规定的一级水，

表3转基因马特著PCR检测用的型物序列及PCR产物的大小

91 PATA XN AK (m 1 r 180 s8 co sh 5.4 R.5°gg pnt tc agg egt oct tg3 115 bo 内对理 备性CaMV 1S F 5'-get et et eet grt ete e-]° 8 igat eg g8g sm gg rg r3' 135 bp NEW LEAPe 静选，董定检岗FMV $S F 5'-agt r ang et cs c g e1' 3t1 ho 票选，签定检测 NEW LEAP* PLUS8 5'-cst lng rgs gu ser igr oag e-3' NEW LEAF* Y 选检制N0S F 5′-gas ir igt gr ogg lci tl* R.5'-ta lor tag mn eg ege t3* 110 bp NEW LLAP* PLUS NEW LEAP Y除选检列 NEW LEAYNPTII F 5°ep tt eet gtr e -} R. 5'-get ot crt grt oga e-3" 173 NEW LKAP* PLUS NEW LEAF YNEW LEaF#FLRVrep 外源 F 5′-cg toa ia ac ng scg ao-} R.5'-t cm ms cm ng 1o sg3′ 172 bp NEW LEAY rLUS 定检FVT) F 5'-gas tus sgg cts tsa cgt ce3 R.5'-qat cg ome lgr te sms ?° 1 NEW LEAPY5'npr pr gre get et e t - 签定检测CryIA 1'-et ees er e ot ct g7 112 bp NEW LEAP NEW LEAF PLUS NEW LEAF* Y

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1197-2003

油菜籽中转基因成分定性PCR 检测方法

Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified ponents in rapeseeds

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标座的附录A老资料性附录.本标座由国家认证认可能警管理委员会提出并扫口， 本标座起草单位：中华人民共和国上海出人境检检检疫局.本标库主要起草人，播类文，此高飞、那家华，新永强， 本标准系首次发有的检验检统行业标座，

油菜籽中转基因成分定性PCR 检测方法

1竞围

本标准规定丁批草甘膜除草剂.抗享丁票除别、维性不育转基国润菜籽的定性PCR检测方法，

本标准适用于批草甘颁分草剂.抗享丁鳞除享到、地性不首袋基我第的定性PCR检通

2药性引用文件

下列文件中的录款道过本标准的引用面或为本标准的条款，凡是注明目期的引用文件，其随后新交是否可使用这查文件的最新本.凡是不注目期的引用文件、其单新版本温用于本标准. 有的修改单（不包格勤装的内容）成参订版均不法用于本标准然后，能梁服基事标理选或势试的各方

GB/T682分W实营空用水建用和实验方续 SN/T1193基国检测实检室提术要求SN/T1194桂物及其产品中转基因成分检物输样和新排方法 SN/T1204根物及其加工产品中转盈调成分实时荧允PCR定性检验方法

3水语、定文和维碍路

下列水活.定文和难略进适用于本标准.

3. 1

s

将物科本身不其有的，来源于其他物种的功能DNA序列，通过备种导人子级，使其在装物种中选行表达，以便该物种嵌特新的品种特证.

3.2

聚合隔链式拟应peymerase chainreection.PCR

计的两条列物分别与腻板DNA丙条情上相泉的一R工补序列发生通火百相互结合-候着在DNA聚合 根板基器序列光经高温变性成为单情在DNA聚合静作用和运宜的反应条件下.数据膜板序列设脂的作用下以四种航氧核糖航配（心NTP）为底物，使引物得以延伴，然后不断重复变性、退大和延神这 一键环，使模扩增的基因片设以儿管数护造，

3.3座尾者

3.3. 1 PCR;polymerase chain reartion R称 PCR 3.3 2DNA，deoxyribonecleie acid.级氧核胞核股 3. 3. 3 dNTP deoxyribonucleoxide triphosghate-鼠鼠核苷股三腺服 3. 3. 44ATP deoayadenosine triphosa-服K B管二确据 3. 3.5 dCTP deoxycytidine triphcaphate.最氧的量三确能 3. 3.6dGTP：deoayguanosine triphosphme.长氧央三确股 3.3. 74TTP:deoxythymidine triphosphene.版氧期t三确报 3.3.8dUTP;deoxyuridite triphosphate.股氧聚世三成航

3.3 9UDGurari DNA elyeoxylae 尿电e DNA帮基脂 3.3. 10bp：base pair 碱基对 3. 3. 11 EDTA;ethylene daminesetraacetit acid.乙二胶F乙R 3. 3. 12 Tag.Tog DNA Polymtrs.附B DNA R分M 3. 3. 13 TE Tris-HCI EDTA 缓冲液.3. 3. 14SD5sodicm dodecylsellete，十二候基磺最情 3. 3. 15Tris:tris (hydroxymethyl) aminomethane-三(胚甲基>氨基甲姚.3. 3.16PEP：phophoenopyruse carboxyse me，确脂地醇式丙国酸股化酯 3. 3. 17 FIV 3SS 35S promoter Irom a modified figwort mossic virus(ceulimovires group) 花3. 1. 18 C74 EPSPS 1-emolpyrurylahlkimate-3-phosphate synthaoe grmr 5-事 章般-3-鼠股 合 i指 叶素毒355自动于.3. 3. 19CTP chloroplast twnsit peptide gese D细体运输数签因. 基因.3. 3. 21 E9 3' 3’ soquenee of small subunsit of rbcS(ribulose-1 :5-bisphosphane carboaylast) E gee 3.3. 20G0X:glphosate exidoreductase gene 苹甘膜氧化还原酯基因.（fnompea）.米源于激豆的教期糖-1.5二确整院化属E9基因小亚基3确序列.3.3.22CaMV 3SS 35S promoter from ewuliflower moxsir virus 飞那幕花叶病毒 35S 自劲于 3. 3. 23 PAT ; pheaphinotuicin aostyltranaferase grne Irom Bacilier aewyleliqur fecieu 8 于 #FB3 1. 24BARNASE riboeurlese gee fom Beoifhs emyfoligfaciees 泉 B F 杆 Bacils Berrliax amyloliqutfaciens 草T情乙能F移解基网 omyiofiqerfacieu W ribotuclease 基因 3. 3. 25 BARSTAR:specific inhibinor of the bernase gene from Barifur amylofiparfaclexs-&8 于HF Seri/lar m ylelijuefecims 的 bemase &因的排排3制&区 3. 3. 27NOS; promoter ol sopalinr syathae gene (rom Agrabucterism lamr fecirms 米B于8杆 B) 显指城合或辨基四追动子.3.3. 28NOS 3' termineter of eopaline aymthase gene B指城合成期基世将上子 3.3. 29OCS 3octopine symthase gene teminator.意鱼碳合成腾盈四终止子.3.3. 30 SsuAra mhulose-1 5-bisphosphate carbosylase small subunit atslA promoter frem Arahf- depni Aelians，东国于拉用否的 ribulose-15二确数度化期小亚基atsA基因的电要子 3.3. 31 TA29; developmentally regulated promooer from anther-specific TA29 gese from Nicoriens lc，来源于级草的花震持异性TA29基因的发育调节应动子.3.3. 32 TR7 3′s3’ regulatory regisn from Agroberieriam hunr faciemr of the T-DNA transcript 7 8强干衣杆类的T-DNA转扇子7的3调节区城，

4防污染3

检测过程中防止交叉药染的脂施校频5%/T1193中的规定执行.

5抽样和制样

5.1抽择

技期S%/T 1194中观宅的方执行.

称取性20 g 推案杆样晶经干热灭前（150C干路孩处理2h)或 120℃、30 min 真压消毒处湿的通

体成粉碎抗中骤墨至样品粉末聊轻时0.5mm大小.

6测定方法

6.1原理

种品经过提取DNA后.针对特基固植物所人的外源基医的基因序列设计引物，通过PCR投术，特异性扩增外源基国的DNA片斯，板据PCR扩增继果，判断该样品中基否含有转基固成分.

6.2试到和材料

除另有规定务.其他试别为分新纯成生化试列，水为检账GB/T6482规定的一级水.

6.2. 11 mol/L Tris-HCI暖冲减（pH &.0)，排取 121. 1 g-Tris.指于 800 mL 水中.提排.人浓盐酸42ml.冷母至室盈，用降盐酸准确调整pH至&.0.分装后高压灭图备用.

6.2. 2 0.S mol/L EDTACpH8. 0) 在 809 mL 水中排人 186. 1 g Na -EDTA • 2H O 在避力提排B剔 视拌，用氢氧化销调节溶度pH值至&.0（约省20氢氧化钠颗粒），然后定容至1L.分装后商压天备用，

6. 2. 3 DNA 抽提缓液 量取 300 mL 1mol/L Tris-Cl.50 mL 0. 5 mol/L EDTA 称取 5.0 g SDS 15.348黑化销定容至1L.分装后高压灭菌备用

6.2. 9 TE 级 *度(pH8. 0) 量 取 10 mL 1 mol/L Tris-CI(pHs.0) 和 2 mL 0.5 mol/L EDTA(μH 8.0），加水定容至1000mL-分装后高压天备用.

6.2. 1010×PCR很冲液

含 500 mmol/L 氮化钾 -100 mmol/L Tris-HC)(pH 8. 3) 15 mmol/L 贵允核(MgCl ) 0. 1%明度 6.2. 1110 ×氧化胰:25 emol/L 6.2. 12 10× dNTP; 含 2. 5 mmol/L dATP dUTP.dCTP dGTP 6. 2. 13Taq W S Unit/saL 6.2.14引物，根表1的序列进行合成引物加超纯水配制成100μmol/L储存，直接用于PCR测试的引物陈度为5mol/1.

1检测转基因油菜肝内外源基固所的引物序列

reK 火里F'-gtgegng-3 g/bp 度/CPEP AN "-cgemunpmpr-1 1"-atcgetcigoc-]′ 44 选择其-"-gemoaragr? 111 01'-gcterergc-}’ 1'-grapessmpespcr}’ 195 55CaXVsS F'-retcmgstsmgpa-3′ 1'-ctecctngioupe3′ 165 适得其

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T

玉米中转基因成分定性PCR 检测方法

Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified ponents in maize

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标准由国家认证认可监督营理委员会提出并扫口. 本标座的附录A为资料性附录，本标准主要起草人，营际胡、明生、产行安、赵新，正秀券， 本标准起享单位，中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局.本标准系首衣发布的检验验疫行业标准.

玉米中转基因成分定性PCR 检测方法

1围

本标准规定了王米中转基因成分检验的推样、制排、PCR换测方继.

本标准的通选检据活用于玉采中转基因底分的定性检测.

本标准的蒸定椎期适用干玉米MON810.B11.Erent176 T14/T5.CBH351、GA21品系折高因成分的定性验测.

2益性烈用文件

下列文件中的条款通过本都准的引用面成为本标准的条款，凡是往明目期的引后文件-其随后别有的得改单（不包括我误的内容）双参订级均不适用于本标准-然面，最助极据本标准这或协议的各方研 究是否可使用这些文件的靠新版本，凡是不注目期的引用文件，其最额取本适用于本都准，

/SN/T124楼物及其加工产品中转基四成分实时荧光PCR定性验验方贵

3水语、定文和略绳语

下列求浴、定文和紧略福通用于本师准，

3. 1

特基因trpo

将物种本身不具有的，求票于其他物种的动能DNA序列，通过各种导人手改，使其在该物种中造行表达，以便谈物种额得新的品种特死，

3.2

聚合磁提式反应pelymriie cain rectio，简称 PCR

板基罚序列先经高温空性成为单桥，在DNA聚合酶作司和适宜的及应条件下-根账模板序列设计的河条引物分别与模板DNA两条链上相应的一我工补序具发生通面相互结合，提营在DNA聚合 酶的作用下以四种就氧核糖被酸（dNTP）为系物，使引物得以延养，然后不账重复交性、退火和延伴述一通巧，使就扩增的基因片我以儿何保数扩增，

最E'E

3. 3. 1 PCR;polymersm chain reaction /R If PCR 3.3. 2DNA，deoxyribonucltit acid-脱氧技糖板散.3. 3.3dNTP;deoxyribonureoside triphosyhate张其放世三确R. 3. 3. 4dATP，deoxyadeNOSine triphosphate 服氧B售三确级 3. 3.5dCTP:deoxgeytidine triphosphate B其BB三确R. 3. 3. 6dGTP deoxyguNOSine triphosphase.股氧与带三码股.3.3. 7dTTP;doosythymidinw triphoaphate.脱氧摘货三磷最 3. 3 8dUTP;deoxyuridine triphosphete脱氧尿甘三确

3. 3.9bpbese peir.诚孤对.3. 3. 10 EDTA ethylene diaminetetraacetic acid.Z二按四乙R. 3. 3. 11Teg: Thermsr aquetica 水生哲置 3. 3. 12Trintris(hydroxymthyL)eminomeute.三（是甲E)氨基甲级. 3. 3. 13 TE:Tris-CI EDTA B冲R.3.3. 14IVR，ierte 1 gme Irom maie.五米的转化醇 1 基. 3.3.15Ze五.术醇编蛋白基因.3.3. 18CaMV 35S.35S pmoter from iflower mosaic virus.自于花都菜花病春的 3SS 自 动子.3.3.17NPTII:neomycin-3'-phoshotransferase gene-新霉R-3′确股转建指基因. 3. 3. 18NO8; terminator of nopalne ayntaae gen.期明合成期基周此止子 3.3. 19IVS2;intron from the maine aleohol dehydrngenast gene.王术醇脱家脐基因的基因内区 2 3.3. 20PAT;phsphinothririn aoetyitransferase pne.草T降乙照移弱基因 3.3. 21HSP70 0 8 Kh incron from the kp70 geme (boat-ahock paonin) 京B热体克显白(Aup7U) 因的0.8K基因内区3. 3.22 CrylA(b): a synhetie gese eneodes the fiest 648 amino arids.ineeticideb-active ftruncoted product idrmtioal to that of Cry IA(B) gete ef Bacillas tharingieuis sobap苏云金常苑杆图杀毒蛋3. 3 23CDPK;calcium-dependent protein kinase(CDPK) grne 钙积额蛋白股期基因 自cryIA(e)基因.3. 3. 24 Cry9C insectieidal-active ftruncened product idesticel to that of CryeC gene of Baciller Aaringisir sub苏艺金劳指杆西总虫毒置白 CryC 基因.3.3. 25CaMV3SSI:35S terminator of CaMV grmcms 花椰菜花叶病等基显班的 3SS 将止于 3. 3. 26P artis 1 the promoter deriored from the rice (Orye arbe) actin 1 gre 8显于系求鼠蛋白1基因的能动子. 3. 3. 27OTPoptimieed transit peptide geme 优化迅输肽孤图 3. 3. 28miEPSPS;maiae 5-enolypymuvyishilkimate-3-phosphete syethase 来温于五东的#年眼股基乙

4污染指路

检过程中防业交又行鼎的牌施族际SN/T119中的民定执行.

5捕和荐

5.1抽特

按然SN/T 1194 中规定的方岳执行.

5.2特

移取约20g 玉米神晶经干热灭菌（150℃于热现处理2 h)或 120℃ 30 min 高压消毒处理的驱体或指啡机中确带至样品粉本要粒约0.5mm应右大小.

6定方法

6.1原腺

特形世扩地外源基四的DNA片版，级数PCR扩增结果，判断实样品中是否含有转基园成分. 样品经过提取DNA后针对转基因植物所插人的外原基因的基园序列设计引物，通过PCR技术，

6.2试别和材料

除另有规定外.其他试剂为分析线或生化试剂，水为投照GB/T6482规定的一级水.

6.2.1引物：检测转基因五未内、外基因的引物及其信意见表1.

表1检测转基因玉米内、外源基国所的引物德息

（/楼T） 引物列IVR AS 1'-igngmwgeemgaco-1 5'-gpgcnguagagaggat-3 58 内源多据任选其Zrin 1'goagomgrer3 171 S8CxMV 368 5′gtertscsutgcst F'pagreeemgegor!' 135 55GMV 358 '-ecttggeg}’ 1$ 55 资选检测 任选其NOS 'atgggrg F-mtagmgggr] 180 55NOS F'-icgttcecatggce-l’ 5'mgggga- 365 选控图NPTIE 5ggg- 1"-ggctegrgrgaeccn-3 183 56PAT 分 5'ggcemmceeseie-3” set 选控列BAR 5′-gaaccaactgggtat0-3’ 175 4IVS2/PAT 外 5'reggecgcsagtegw? 5′-mgagcaaggtarie-3 189 鉴定检列5"grgnguprggcanr-3 5’ngaggacguggsctctasg-3′ 66 签定检测 BT11/CaMVISS /0dSH 5′gttoctgcictem3′ 5'-stegesestgg!” 194 66 基定检测 MON831CrylA(b) CDPK/ 5'gngmngr!" 5′-etetegocgtmatgtteg° MONE31 基定检期CrylA(b) PAT/ 5'-agteggtogptpig-3 5'-eggggorgargoe-1' 定检关 176CaMV3SS1 CeMV355 外 5'-pgrgaartataguoco-3 5"-cmtegoasgocttencuna-3’ 229 5 TI4/T2CaMV35S/ /PAT 5′'agarcatoatnactetgregtg-3′ 5′-sgraagocttemmta-3’ 1 T1/TH 定检测CryC 5'gagngracg-3 379 CBH-351CMV3IS! CryIC/ 5'-nstacncguogcatig-3′ 5'arssmngp 1 371 55 CBH-351 定检测P aetin 1/ EPSPS 外 1'stgnmgoggu-3 5'-gagorogmategc-3 (0 55 定验务 GA21mEPSPS OTP/ 5'wraopeoagug-3 55 定检房 GA21

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1193-2003

基因检验实验室技术要求

General requirements for the laboratories for gene detection and identification

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标康由国家认证认可位营雪理委员会现出并购口.

本标车起享单位，国家质量监督检验检疫总局动植物检疫实经所、中华人民共和国深新出人境检验检疫局、中华人民共和国广州出人境检验检疫局、中华人民共和国江宁出人境验验检疫局.

本标主要起享人：朱水芳、陈红运、黄文胜，票文、章微明、青际期，

本标准系首次发布的检验检疫行业都座.

基因检验实验室技术要求

1范围

本标准规定了转基因产品检测实验室总体要求、质量控利和质量保证.

本标准适用于转蒸器产品检测实验宽的建设和质量控制，

下列术活定文和星略语适用于本标康，

2 1

#高 国J* genetie ally modified organisms GMOs;biotectnology modiied products

又呼生物我术产品，指用基四工程我术成者其他现代生物技术改变基组构或的动物、植物、微生物及其产品.

2.2

聚合酯链式反应polymerse chainreaction

聚合酶链式反应美称PCR，用一对事核苷酸引物.种瓶氧核糖模背限（NTPs）.在合适的温度、高子条件及财热DNA聚合辨组化下.在体外人工合成持异的换数DNA片段的过程.

2.3

实时贷光 PCRreal-time aoresceet PCR.kinetc PCR.bemigaeos PCR

池加了变光信号检测系，使得PCR扩增产物的持异性及数量检别与PCR扩增同步进行.实时光 在传统的PCR反应体系中-加人了扩增模版特异性的费光标记条交握针，同时在曾规的PCR仅上PCR报针有多种 常用的有分子齿标(melecular bescoe) Taqman 探针和杂交双球针等.

2. 4

dUTP-DNA措基化酶UNG UracDNA gcylax

一种持摄的DNA水新，它只水系有dUTP的DNA，此期防行朵的条什忌，在PCR扩增红程中用&UTP取代 dTTP：在PCR开始首用UNG募处理PCR扩增反应涨在城性条件下真遇（95C)断聚 DNA

2.5略语

2.5. 1PCR polymerse chin rewetiom，聚合链式及应两称 PCR 2. 5.2DNA deoxyribonucieic acid.脱氧模据披胶.2. 5. 3dNTP deoxyribonucleoside triphosphate-服航书甘级=确级 2. 5. 4 UNG; urseiHDNA glycosylasc-尿署或 DNA-糖基化册 2.5.6dTTP;deoxythymidine tuiphosphate 股氧病甘三级胶 .2. 5. 7dUTP:deoxyuridine triphospheme 脱氧联甘三磺酸 2. 5.8 bp: bese pair.i.基X.

3实验室总体要求

3.1基因检验实验室区端设置原则

增反应提合物配新和理区、理产物分折区，加最使用资光PCR仪，扩增区和增产物分析区可以 转基因产品检测实验室分为五个医开的工作区域：试剂贮存和准务区、种品粉端区、样品制备区、3合开.

转基因产品检得实验宝五个隔开的工作区城中每一区域都须有专是的仅器设备，

工作区城及各区城所用的仅器设备必须有明确的标记，避免不到工作区域内的武备、物品限用.

各区域实验台表面应可耐受次氧数销，双氧水等化学物质及索外线的消毒清洁作用.

3.1.1试到老存和准备区

本区的功能为：贮存试剂的制备、试列的分装和主反应温合液的别备.

汇存试用和用于样品制备的材科应直接运还主试剂肥存和准备区，不组经过产物分析区，试别原材料备须贮存在本区内，并在本区内别备或所需的贮存试则，当肥存试据雅液经检查可用后，应将其分 装肥存备用.

通常在实验室内一次厕定所需的矿增反应数来执定， 大多数用于扩增的试烈都应冰冻汇存.主肥存试则-应分装冰冻肥存.贮有试烈的分整体积程据

面报管，对于*热自动“战术，星会前色可不包含在主反应润合微中. 主反应混合额的题成战分光其是累合孵的适用性和稳定性通过预试验来检查：评价站是必须有书

3.1.2林品粉证区

本区的办露为：对样品进行粉碎.

祥品在此区粉碎，特梦到样品处理容香并加人适当林整挂提指液后，再进人样品别备区.

后，再进人种品制各区，将其余种品好存后送目种品制备区. C粉碎好的样品，在此区抽取所需松润用的试样，转够到样各此现容器并加人通当核服快提编液

老碎机要款置在特气岭防行染排作台上，每个样品要单独使用已御底消洗过的器目，

基在单独的房间进行，并且委远高其他操作区域，

3.1.3祥品制备区

本区的动能为：特检样品的保存，以服提取上存及其人至扩理反成管，

评价.别备好的样品模股安C底在超低服冰格中. 本处理对核胶扩增有很大影响，企须使用有效的被酸提取方法，可在开展检到前对握取方法送行

加人特测核就后，必级置好含反应据合班的及应管，开进人汉应扩增区， 本区可部分或全部设为正区条件，吴试剂肥存和准备区拿来的主区应混合报-在此区正压条件下

3.1.4扩地区

本区的研能为，DNA扩增，此外，已新备的DNA模板的加人和主反应氧合服（亲自试别忙存和制备区）制备成反应提合额等他可在本区内进行，在集式PCR调定中，通常在第一能扩增后必须打开反应管园此果式扩增有较高的行身危险性第二次排种必须在本区内选行.

3.1.5扩增产鲁分析区

本区的功能为：扩理片段的润定.

核服扩增后产物的分析方品多种多楼，加票上或微孔版上探针杂交方获（具位累务记或非同位累标记）.球国糖发胶电8、星丙然配族藏腔电冰、Souhern杂文、核账测序方法等.

在使用PCR-EL1SA方法检测扩港产物时，须使用驶板机洗板，

增产物从求区事最至首面区成的可载性 本区是最主要的扩增产物与桑来额.本区如采用负压条件或减压情况下（如安装排风期）可减少扩

3.2基因检验实验室工作人民操作医求

物配新和增区→扩理产物分折区.

不民的工区城使用不民服色的工作服，工作人民商开各工作区域时，不得将工作服管出.

实验室的赠济应指试剂肥存和准备区→扩理产物分析区的方向进行.不网的实稳区城应有其各自

实验操作过程中，操作者必须能手套，并经案更检，此外，换作中使用一次世帽子也是一个有微的防止为染的我惠，

严禁用嘴吸取液体，地样器和报头等必须经高压处理.在操作过程中要正确使用加杆各，避免有加科操中产生气用胶行用.

用过的加祥器吸头必须效人专门的须寿容器（含1%次氯酸的溶技）内，实验室卓榜表面每次工作后部要请结，含有PCR产物的任何应成必须收患罚1mol/L盐酸中，并且不能在实验室内领倒，王应 到远高PCR实验室的地方弃排.污染了PCR产物的吸头电必须政到1mol/L盐股中受思后再放到垃级装中按程乎公国（加黄经），

在样品轻师、制排、板航拍费等过程中出我实验材料整落或PCR产物外限时必须立即进行清链处现并香出记家，

工作结束后必须立街对工香区进行境结.

实验室及英设备的使用必须有目常记录.

3.3安全M护

装基因产品检撕实希室工作人员在整个实验操作注程中要载手套，在保光、有客射线环境工作时委熊防护骤统.前护服求采用其佳实全有放情饰：

3.4度高物处理

康弃物要进行高盖须后再微处题，有寿有客度物要经过除害再做处理，处理要符合环保要求.

3.5组果列断和验证

基因时，图进一步进行检测是否含有其他外源基因，用管属的PCR-电方接检别出样品为阳性时图 当一个排品间时教期出两个减周个以上外基因时，可判断为转基因产品阳性，当检到出一个务额进一步作验证实验，验证方法可适用实时费光PCR方法和样品品模酸杂交方法.

4反量控制与次量保证

4.1室内新量险制

4.1.1品的测试过程中的质量拉制

4.1.1.1样品别备

1. 75-2. 0 之网 常用260nm和280nm光密度的比值米检象神品核酸的纯度，纯的DNA，其OD/OD密该在

4.1.1.2附性控和期性质检

使用内标进对核脱的扩难进行我控，扩增检期的内标通靠为在是个细账周期中均匀表达的mRNA或者基个基四DNA片段，当样品中存在扩增持制物，减棋酸提取中发生DNA降多.或7og 大新，内标导会表现为别性结票.

控标本，与持厨特品等间处原益收校酸及扩带，以烈断护道检机历效果. 在测定转基因作物的GMO含量时应使用C知的低笔度的样品（数0.1%的转基因作物）作方蛋

品制备的整个过程中新带的空自管、仅有扩增反定被但不含扩增模板的及应管，润性押品等.这些质担 每一个PCR实验中群必家论有外加阴性质控（污染监测质控），闭性累控可包据如下儿种，即在标

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1182.2-2004

禽流感微量红细胞凝集抑制试验

Haemagglutination-inhibition test for avian influenza

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标准的附录A为风范性财录.本标准业国家认证认可业警管理委员会提业并扫口 本标准配革单位：中华人民共和国乘海出人境检验检疫局，本标准主要起草人：徐海亚、薛最山、潘文波、享秀云、周思波、王小玉.本标准基首次发布的出人境检验检疫行业标准，

禽流感微量红细胞凝集抑制试验

1范图

本标准提定了用张量红组胞减集抑制试验检测禽流感抗体的试验方法.本际准通用于武买商感检疫、疫情监图和流行病学调查.

2试剂和材料

2.1试剂

化学试剂均为分析线

2.2pl7 2.0. 1mel/L 确酸签握冲液(PBS)

配制方法见附录A.

2.3红胞

配制方肤见附录A

将鸡红组胞用PBS转释或1%意否液.

2.41%鸡红纸胞是浮渣

2.5标准抗净

流感HS.HT.H9等标车抗原

2.6标准血清

流感HS.H7、H9等标维阳性血济和标准用性血源，

2.7被检血液

2.7.1无菌采取动物盘液、凝题阶高心分高血请，置于4℃或一20C保存备用.

2.7.2除鸡外其余案的血请用光确定是否存在非特异性减集，有特异性登集的血清按下列方出进行 处理每 0. 5 mLa清 25 pL 红年的润缺% -B显 30 min.2 000 r/min其心 2 mia~3 mn.L细图区聚，取出吸附过的血请供检.

2.8器村

架盘天平、分析天平、离心机，V墅缴量血提板，微型预荡器，可调移液器、恒握箱等，

3膜作方法

3.1数量血凝试验

做量血碳试验见表！，

表1 武沈球微量自凝试验

7 2 3 3 4 5 7 3 9 6 19 I1 对R 12PBS/FL 25F 257 25′] tsJ 25] SJ 21′ fsz 2s 25] zsJ 25] 251%海组8/AL FBS/L 15 s2 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 26 25 25 25 25 23 25 25 25 25 2% 21 52时间及 的20）下静置mis左宅*(-

3.1.1在V微量血限板上.每孔人PHS2L

在3.须次类推作等量借比矫释至孔11.孔11实去25pL，礼12不加抗逐设立为红细胞对用，

3.1.3每孔人 PBS 25 μL

3.1.4每在加人1%红相险量浮班25p.2即置量型握嘉都上高或手持北泵版殊得面课年.

3. 1.5室星（龄 20C)下静置40 min左右：如景室温太高 可在4℃静置均60 mis 对黑红细胞是明显 的握点状时进行杭原新价判定，完全业减的抗原最高餐帮度为该抗原的血概教价，即一个应提单位(HAU)

3.1.64HAU抗原的标定

3.1.6.1根塞3.1.5测定的抗原的血凝效价-计其4HAU抗原的稀帮倍数.州题表1批原致价为

3. 1.6.2特25 p1. 含 4HAU 的权原用PBS他等量倍比属静，使母孔(2I μL)含有2 HAU 1 HAU 0 5 HAU 0 25 HAU 每礼补加 PBS 25 p1. 弄加人 1%鸡红组胞 25 yL-判定血限图像与期结暴是 否相排 2 HAU、1HAU在红细胞应也观究全酯集.0.5 HAU孔红组惠定出成50%凝基0 25HAU孔红理胞应不减集，若与此不并，应重新配制航取，测定效价，

3.2量自择制试款

微量血提押制试验见表2.

表2流感量血装际制试验

1 19 1 L2立理界度（ng) r 3 4 8 19 18 L2PUS/aL sz sz L e2 L4 3A17 抗斯/vL 2 25 25 225 5 22 5 21 25 25宝国的 2/)下鲁量显乡 30 min州对间服度 =--[ 董星(约2/)下静置分40 mis

3.2.1在V型微量血减板上-每礼加入 PBS 25 pL

3.2.2孔1加人披检盘待25xL.作等量比释至孔12.

3.2.3每孔加人 4HAU 的批原 25pL混匀.

3.2.4室鼠（片 20℃1下静置至少 30 nin.成4静置60 min

可在4℃静置约60min，待对照红细量显明显的圆点优时判定继果.

3.2.6每皮测定应设巴知满度的附性血清.阴检血情和红增胞对照（仅含25pL1%鸡红源胞和59p1 PBS)

3.2.7果判定

3.2.7.1红组胸均匀分航在孔庭同图、领斜血题板时不流换判为完全凝集，记作：755%凝集记作：50%复集记：25%集记作：红细胞集中在礼中央显器点、颁科血疑板时饿病判定 为不复集或盘影抑别记作一.

SN/T 1182.22104

3.2.7.2检查各种对照，别性血请该定<2（1：4），阳性血清诞疫不超过一个资度，红婚胞对照无自 凝或象，试验藏立进行结果气定.3.2.7.3能光全押制4HAU抗原的盘请最商得释度判为该血清的血限抑制滴度. 3.2.7.4血的血能抑别镇实2（116）.判为阳性.

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1182. 1-2003

禽流感抗体检测方法 琼脂免疫扩散试验

Detection antibodies against avian inftuenza virus- Procotol of agar gel immuno-diffusion test

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标准根据 OE/Chapter 2. 1. 14 4th edition.2000 (诊断方拉和疫苗标准手量)Mabual of stand-ands for dngotic tests snd sccines)起章

本标准的附录A为资料性附录.本标塞由国家认证认可监督管理委员金提出并归口. 本标票由中事人民共和国珠海出人境检验检疫局负贵起章，本标雍主要起章人潘文技、景山，徐海、廖秀云. 本都准系首次发布的检检检疫行业标准，

禽流露抗体检测方法琼脂免疫扩散试验

1范图

本标星规定了驾流感建指免统扩散试验操作规程.

本标靠通用于检测禽类血源中显否含有高流感（A1）病要抗体.主要造用于黄类高流感检疫，疫监测和筑行病学调查，

2规观性引用文件

下判文件中的条款通过本标准的引用民成为本易准的兼款.凡是注目期的引用文件，其猫后是否可使用这些文得的最和级本，凡是不性目期的张用文行，其量新本运用于本标度.

3原理

非度区域扩教时质受阻力硬小，湿本上望自由扩散那式，由于不网航原分子的分子量，结构、形状和电 杭原和机体的分子量一般群在20万道尔顿以下-抗系及其特异性抗体在凝放中系高体度区城向低荷量不网，器此其扩散系数不网，查凝胶中的扩散速度这就不间，端抗原与相应抗体组扩能后在凝胶中 推遇，形底抗原抗体复合物署润者在相遇此比例运当，则形或最大的复合物，由于复合物的分子量增大，颗松增大，国面不再是模扩款育产生沉奖，量现出域状减带状，其形成的或状或带状被称为免疫抗案 线成免疫沉院审，器此，可数据忧原与被检盘调之民免否出碳试究线求判定横检自清中是香容在特屏查抗体.

4材料准业

4. 1 试列:磷数二氢钠(NeH PO - 2H;O) 质酸氢二钠(NsHPO 12H O) 氨化销（NsC1) 叠案 家错糖均方分界纯.

4.2称脂矿散试验抗原.标准阳性盒清：血指定单位供应.按说明书使用.

4.3都材.吸管，量览，平鼠（院赖为90mm×15mm） 三角航、外约5mm业属打孔器、优量移糖器和孩量发头，我那灯等.

4.4被检血清，按靠规方进乐血分高血请.它无缩盒，无细图污染.保存于4、

5操作方法

5.1试偿用水

本标塞新用水应符会GB/T66821992中三级水（三幕水>的规情要求.

5.2 对脂的制备

5.2.1班瘤溶波的配制参附录A

5.2.2制板传地腺溶锁自然冷都至约56时，将直植为90mm浩净灭菌的平区置于水手平台上，每 个平公加15mL，使炭较等实达2mm~3mm，加置平温特自然冷凝提后.将平二例置盒中，4T

SN/T 1182.12003

冰箱密时备用，

5.3打孔

孔中的琼期用针头轻轻统生现吸出，勿伤边维，以免涉漏，加热封底（一次性树滑平国除外）. 反应孔现用现灯，从冰箱内取定琼脂板-按图1或图2打孔.孔径约5mm，孔距2mm~5mm，将

度 1

2

5.4加样

用微量移锁器吸取抗原基液加人G孔，期性对限分别加人孔中-受检血清按顺序分别加人其余各孔中，每孔均以如请不货出力度，想加一个带品应换一个演头，

5.5反应

24 h、48 h.72h 现服井记录结. 雄样究毕后-B止 10 min.将平里例置-款人湿盒于室疆 22°℃~25℃下细育 48 h~72 h.分别

6集判定

6.1将球脂板置属色背景下观察标港阳性血清与抗原孔之两出现一条清唯款密的白色沉提线，则试我成立，西期视为元筑，需重夏试试症，

6.2若被检血清孔与中心批原之闲出现沉淀线，并与标准阳维血清的沉提线末端平滑相连候（如图1示1号机），南被检盘提判为用性.

6.3被检血清与中心杭原礼之网属不出现沉提线-但标准阳性血领的沉能线一明弯向被检血消孔（如

6.4妇接验血清孔与中心批原孔之闻不出观况健线瓦标准脂性血清风胞线直肉被橙血滑孔我向其务何编弯者（知图1所示2号礼），则被检血清判为明性，

6.5被检盘清礼与中心抗原孔之间况能线与标准阳性业调与抗原礼之同的润线交叉（如图1所示4号孔）则判为非特异性反疫应重置该试验.著仍出现非特异性区应则判为用性.

（资料性附量） 附录A

A. 1pl7. 2 0.01 ml/L PB 胎别鲁

水 1 000 mL 1.56 g水 1 000 mL 3.585 g

流：磷二氧情（NH，PO2HO）乙减：类B复二镇(Ns HPO 12H O)

兼甲2.二源充分溶解后-分别保存，用时取甲液28mL.乙72=1.理合即成.

A.2斯溶的制备

0.9 6赛化钠（NaC1) 8.0 E 0.1

pH7 2 0.01 mol/L PB定潜至 100 mL~高压 105 KPa15 min 成300C水历素沸亚完全治解

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1181 2-2003

口蹄疫病毒抗体检测方法 微量血清中和试验

Detection antibodies against foot and mouth disease virus-- Protocol of micre-serum neutralization test

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标据采照O4EX非新试验与疫资标准手册12000年第四版2.1.1章的相关内客起草本标维的附录A.财录B是标准的资料性附录. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并街口.本标维起草单位：中华人民共和国珠尊出人境检验检疫局. 本标准主委平人，标素，非景山、昌宏，两家望，本标准系首次发布的检验检疫行业标准.

口路疫病毒抗体检测方法微量血清中和试验

1范图

本存车现定了口四交我毒量建血消中和试独方齿本标掌运用于口部疫病毒中和航体水平的检测.

2规竞性引周文件

下列文件中的条款通过本标建的引用面成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件.其随后的修改单（不包担物误的内容）减修订版均不适用于本标查-然间，跟助根据本都准达成助议的各方研究 是否可使用这叁文师的最新版本，凡是不性日期的引用文件，其最新版本通用于本标准，

3综略浴

下列笔略活道用于本标准，3.13.2 致维购病变作用.YCID 3.3FMD 口海疫.

4原

是，这一反应不组表现为一种病毒只能被相应的党疫血清质中和，两且还囊民在中和一定量的病看，必 特持性的血清中和抗体与病毒结合后、使病毒失去对敏感细脑的感录能力.员百阳止病毒的繁集毒50%致细账病变能力时，其准增的解称度甲为其效价.因而本中和试验是一种定量预定口疫生 领有一定效价的免疫血清，本标率规定的中和试验是以定量病毒机释自为基础，当重请座阻止定量请祝体的方齿.

5试到和时料

5.1本标冻所用水应行合GB/T6682-1992中关于三级水（三蒸水）的航垫.5.3本标座试则障特殊规定外，均指分析试到. 5.2本标度所用试配方参见附录A5.4本标准所阳试剂、孩聘添正有特殊视定外，均需高压灭街. 5.5病毒选用经险现线化井经盘情李蔓定的O.A.C、SATSAT、SAT，相Ail型口端疫朝胞毒分到作为各型生确抗体检洲的标查毒.

SN/T 1181.2-2003

5.6标准血济：标准用性血清采用无口局疫病毒抗体的指血清或牛业清，标准阳性虚清采用口障疫病 尊感免发疾21d的康发站血义牛业调.

5.7朝路系IB-R2或BHK-21期胞系

5.8组胞增养基：含10%无口即疫病毒抗体的输牛血盾（经54℃，30min灭能）及抗生累的细脂培

5.9理维特技：含2%无口罪疫病毒抗体的胎牛血携（经56C，30n灭能）及抗生家的期压培

5.10级胞分散：

5. 11国定推的配制-10%甲图（900mL生理盐水100mL甲脂）.

5. 12染色兼的配新：1 000mL固定糖0.5g亚甲蓝.

6卷和设备

6.1二氧化碳培养箱、票量拆历器、闽置是录键、冰验（一20℃保存业辨.一70C保存种毒）.6.2100mL细胞培费瓶、96孔微量娅胞培养板、吸头、多道可调移液器.单道可调移液委.

7别备试额

7. 1将口腾疫病毒O A C、SAT 、SAT、SAT 和Asal童分别胰种IB-Rs-2 减 BHK-21细胞单层，37°℃吸附1h后加人地持被，量5%二氧化碳培费箱于37C培养-接神24h后用例置是微健逐日现账， 待CPE达75%以上-冻融一次成置水指中用题产狼处理（40uA 1min） 2000r/min离心20min.上清被分装小属-母航1mL.置一70C保存备用.

7.2病毒毒价的剂定及其工作浓度的配制：将府毒面推同缓胞维持液做10倍系列释至10-”.每个稀实作4个孔，每孔50μL每孔加50pL组图进液（含10°个级胞/mL).再补充里的维册硬50y 每块板设4孔正常细愿对烈，于5%二氧化碳培养箱37C地养.月48h开始至166h用例量显做镜逐日现察记级CPE披Karer方陆计算TCIDu，将病毒原服起制成300TCID/50μL.特用.

7.3将标准网性血清、明性血清、被检血清经S6℃30min灭能-异用.

7.4将细胞用准胞地养成等释成10个细胞/mL，待用.

9中和试秘

8.1对除设立

8.1.1细路对现：记《孔正细胞对烈，每孔加细脂量液50L（含10个细胞/mL).细胞维液100 xL

8.1.2阳性对别：将已如演虚的标准阳性血清用细胞难持液在0孔微量培养板上月1：4开始做对倍系列解样，每个种区作4个孔.年孔加各样帮实附性盘销和100TCID/0病寄热推各50.贷 量援实器报医据匀，置37℃中程1h.再加人级医是液50μ（含10个组图/mL).

8.1.3明性对账，设4在明性盘请对洲.每孔L加时性血准和100TCD/50x1.病毒费液各50μ1.高加 入组s量液 50 μ1(含 10* 个样基/=L)

8.1.4病毒网由对限，将各型病毒解那为1000 100.10 1TCID/50xL.每个稀帮度作4孔，每孔加 人病毒基液 50 μl 再加人细的悬成 50 μL(含 10* 个指图/m1.) 毒孔补充期胞准持液 50 y.

8.1.5血清毒性对照：被检血资每个孵释度设1孔血情毒性对期，即50p1.各释降度血清.补充59×1 推持减 再加入组脂盘藏 50 pL(含 10 个组胞/mL)

8.2试验步额

得待枪业济用娱脂增特液在张量养板上头14开始做对锁系列裤押，每个希样度作5礼，每孔50xL 被检秤每个样静度4孔排人预备试检真定好工度的病毒波100TCIDg/50pL微显振 2

的培费箱中37℃培育2d~34.48h用倒置显数镜初判.72h是判，终判抗带固定染色.

8.3持判定的固定染色

冲洗：乳察结果、 去地费基，每孔加50pL圆定核，置定30min.齐去固定液，将板授人染色减中30min，自案水

8.4随果判定

8.4.1结果判定需以对所成立为前提，当病国归为g1.5～1g.5，标准阳雀自增效价与原摘定缴价相差1个滴度以内，参考的性血清对照孔为空自，胞对经孔细愿乘成建色时，才能进行些判.

8.4.2细能显染成蓝色的孔判为阳性，组胞服为空自时判为别性，血请效价以50为终点症清与病靠合中业的总希释度表示.

FMD参考实验室提供的标准试制做非考来建立自已的标准，世界参考实验室的列定标准参见附录B

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1178-2003

植物检疫马铃薯甲虫检疫 鉴定方法

Plant quarantine-Methods for inspection andidentification on colorado potato beetle[Leptinotarsa decemlineata(Say)]

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标座的附录A、附录B为观范性附录. 本标事自国家认证认可监督营理要员会民出外扫口.本标事主要起草人，张伟、克管本、陆平，张祥移、韩冬桃. 本标准起革单位：中华人民共和国新疆出人境检验检疫局，本标库系首次发布的检验检疫行业标准，

植物检疫马铃薯甲虫检疫 鉴定方法

1图

本部准规定了马钟塞甲点[Lpinsterm decmlinnn（Say）的检夜和基龙方选，本好准返用于马铃薯甲点的检疫和鉴定.

2.1马神馨甲盘调精据E（Colesptera）.叶甲科（Chryaolidae）.甲亚邦（Chrysomelinae），度世甲属（Lecinotenw），主要容货物、包装材料，运输工具、土端及随事风迁飞传播.选提供了依数，

3维涨配制

3.110%氢氧化即旅技，氧化钾10g加90mL蒸管水握匀百成，用于本解世处理，3.3乙那将被：在75%的乙醇中加人0.5%~1%的甘独到成，用于成虫和动虫的保存. 3.2基尔马林排液：1份基尔马样（含甲班40%）端17伊~19价是增水播匀面成，用于盘息龄保存.3.4霍氏封片模，将30阿按自树胶放人50mL或水.置于50℃-80℃水指模中，待树胶全维解 后再加人200水合三氯乙墅和20mL.甘油，用班师词匀而成，用于散体解制和生殖器解到封片.

4仅器发用具

4.2培养瓜、烧杯.酒精灯、微型解别刀、解剂针、品虫针、载填片、凹玻片、通我片、吸子、标签、各类孔 4.1显發镜、解到镜、扩大镜.经样费.4.3养血缸、养点盆、养血前. 4.4标本盘：成业针插标本用.

5.1抽查

5.1.1用期机方族进行推查，5.1.2推查件数：按贷物总件数的0.5%-5%推查，10件以下的（含10件）全部检查：500件以下的 推查13件~15501~1000件热查16件~20件:1 001件3 000代物意21律~30f:3 001伟5.1.3亲自疫区的药科组物种子.苗本及其产品，发现可疑疫情，可增加输查件数，每批抽查宜多于50 以上，每增排500件精资件数增加一件（数装货物以100kg比账一作计算）.5.1.4规场推查中发现可疑出样.带国室内做检查鉴定， （批量少于50价的则全部检查）.5.2运输工具的现培检痘

类文件.

5.2.2认其查询运输工具的始发站、途经站及所载资物的产地、种类、数量等情况.

5.2.3检套入境运编工具、集禁箱，包装物内外表、缝除边角等害点增伏和活动场所布无马铃幕甲虫分

5.3客推疫

对素自疫区的人境旅客严格检套其携带物：尤其是范科级物种子、苗本及其产品应重点检查，

5.4疫区动物产品的检疫

对来自疫区的明物产品管别是城毛类产品，电胶上述拍查检验.

5.5检疫检查方法

资物中是否幼虫科成虫

5.5.2虎碳检查：对包装物.填充物、销垫材料.集装箱、运输工具，学物产品零，采用肉眼检查特划是底获的边、角、唯限处，相花包及单毛（线>但的皱据、造、角、继宽片，纸盘转火建等隐整着别，来自疫区的 运输工其时社物法求及瞳家必作重在检查，

5.6收蒸本

通过检查收猫的成虫.续虫、期要及航成光，分别集存于标本盘及相关搭源中，租据盗定方坛进行结量判定.

6室内签定

6.1将成验检疫中收集的那及的生致人养业盒成养盘红中-在室组25℃~25℃下境养54至154.每天亚少现察二次-并饲吸新鲜马粉馨叶片，特幼盘费后.用橙子将幼虫夹起放人半干程秒土的杯 状容香（如是杯）中婚，特容各移至要火箱续培界，特成虫羽化后，在养业箱再饲2d至3d，后制成都本.

6.2瘦时听平属（Lepinre）成鱼主要特证，体长费那.尾确较尖，官图十分供，复限近征肾形.较小、触角短.肉后账抵前旗背板后缘，第三节长于前后各节、湖不五节亚相，略是棒状，越先基突较运真 复内缘，首购背板基绿向后拱弧前角突出向前，前缘凹进，小质片三角影，前翅刻点持或规则版行.理节瘦狭，第三节完整，不银有为二叶，瓜单齿式.

6.3马候套甲虫的主要特征

6.3.1成病

越上具属也级条以五条，第一与第三纵带在尾群交会，头下口式，侯宽，背方辆降起，向前胸增人达理 体长11.25mm±0.93mm，宽6.33mm±0.45mm，短卵签形，淡黄色至红福色-有允师 每处，敏角11节.第一节都商长，第二节很班第五、六节片等长路六节盟著宽于第五节.水节显固键郑. 口器吃哨式-上零有三个明温的的，下额须三节向端那相，第因节显柜面短，图柱那，端求平截，是短转节里三角形股节稍航面衡局.股节编方向放宽，理节显四节，第四节极姬乐届部无附告，雕雄用性 成业外形差是不大，雌血个体一般相大-撑虫最末腺板比胶限题具一级凹线，虫元上这团践，（起房案 A B A. 1.B A-2)

6.3.2幼虫

0.27mm-头宽 0. 90 mm±0.08 mm三龄能点体长 8.31 mm±0 35 mm.头宽 1. 39 mm±0.12 mm2 0 年1600w6 0 u22092静动虫体长13. 94mm土0.83mm，头宽2.29 mm±0.15mm 体色-.二龄继虫晴根色，三龄以后逐渐 交为粉红色成提黄色，头部基色，头为下口式河衡各有六个度状小服分成二级，上方四个，下方二个和各有三个班点，每调各有一个，中间有二个，一阶幼业族胸肾骨片全为黑色-随着生阶的增加前胸背 一个三节的魅角，上腾半图形，中润有缺刻，前胸明显大于中胸和后现-后娠有揭色宽带，中爽和后胸

SN/T 1178-2903

近候色变淡，仅后等为黑色，录最网个体节外，疾体两每有两行大的色背片，5气门背片和上衡骨大，中央部分特别大，向上陵起，以后各节急别增小，末明细失.取都共有九节，一节至七节育医两 开.牌节上的气门骨片星耀状突会，包图气门，中、脂胸由于缺少气门，气门件片完要，腹部积病部登著期各有二个班点上面的一个较大，位于气门的周现，腹部提面有三行小点，降点由密集的短用毛 成，前病背板及需第人节，九节背部有黑色素页，足黑属色，（见附录B图B.1.面B.2）

为高额，体长9.49mm±0.37mm，宽6.24mm±0.25mm，黄色减情黄色，体侧各有一推男色小票点，

6.3. 4

精图，据找尖.即长 1.83nm±0.08mm.宽0.83mm20.04mm，提黄也.少数为情红@

7结果判定

以成鱼，幼业形志特征为依题，特合上进形恶特征可签定为马补署甲虫.

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1174-2003

猴D型逆转录病抗体检测方法

Antibody detection methods for simian retrovirus type D

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标准的附录人为瓶范性附录，本标准出国家认证认可应督管理委员会提出井扫口. 本标准由中华人民共和国公商出人规检验检疫局负责起年.本标准主要起草人，页建军、周税号、徐自忠、应驾松. 本标准系首改发布的检验检疫行业标准，

猴D型逆转录病抗体检测方法

1商图

2性引用文件

下列文件中的条款通过本标库的引用配或为本标维的条款，凡是性日期的引用文件，其能后是否可使用这些文件的量新版本，凡是不注目期的引用文件，其最新版本近用于本标准，

3维略语

下列路略语适用于本标准，

3.1 340维组物病变作用

3.2TCIDu 半数组织培养感染量.

3.3ELISA 购联免交发附试验，

3. 4 Westerm blot蛋白印迹试验，

3.5SDS-PAGE SDS家丙好斯肤胶电8，

4.

4 1 KLISA 原理

EL1SA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗棒分子共快墙合，武种晒合不会改变抗体的免疫学特性，电不影响酮的生物学活性，此种算标记批体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特是结 合，加底物溶液后，底物可在腾作增下使其所含的供案体由元色的还原型变成有色的氧化型，出现额色反应，因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相皮的免疫反应，颜色反皮的探线与标本中相应抗体 成扰原的量型正比，此种显也反应可通过ELISA检据仅进行定量图定，这科就务酶化学反应的单感性和扰原抗体反应的特异性结合起来，使ELIS人方接成为一种藏特算文敏感的检据方法.

4.2 Westem Biot

特异性抗体或美纯的抗原作为探针检测已四定好的抗原蛋自或抗体蛋白，这个探针用特定的放射或骗 先将被验的抗息或抗体蛋白些电冰分高并转移至一种器相支体上，阳航备好的针对抗原重白的最色系统进行标记，通过抗源抗体成应并有显色反应案判断被检物是否的特异的抗体减抗医物质，

5发拆和有料

5.1水：本标准所用水应各合GB/T6682-1992中二级水的规格.5.2病毒狼艾滋费D型进转录病毒（innretrorirustypeD，SRV），由指定单位提供， 5.3血情：猴艾滋府D整逆转录病毒阳性血清、阴性血清业指定单位美供.5.5单.Raj由他定单位供，200 μg/ml 5.7维持波和秘发：维持液为1540培费基中加人2%的胎牛血清（经56℃30min灭插）含青等素 200TU/mL得素200μg/ml.释液为维持液不加2%的胎牛血素，5.8羊抗脱1gG-SPA腾（规根过氧化物酶）、包批班（pH9.6）、封间液、共止液、底物液、血增神释缓冲

5.4被检.

孩等.按限录A配.

6器械和设备

6. 10单头和多头量量移签器及算头(20pL~209z)

6.1例置光学照锁，6.2普通光学显质镜， 6.3二氧化碳培养错，6.4冰箱（一20℃保存点键，-70℃保存毒）. 6.540孔成96孔家苯乙赠.6.6期标仪，6.9确脏开睡家票NC膜）、分析用建联、寿端.

6.7电源视和直电泳模.

7ELISA

7.1提作方涨

15min，次提细胞磷片，上清玻装于通析载，用聚乙二醇（PEG分子量20000）鼠水增五售，用20%~60%兼糖榜度离心挑化抗瓶（2.0mg/mL）.的释成1200或更高.

7.1.2批原滴定：将维缩的批源用H9.6的包被液按不到释度能释包被板，控7.2试验程序排作，2.1~2.5的抗原量高确释度，作为抗原的滴度，每批抗原流定一次. 每得释度加120的阳性血清和买性业，进行试验.在414mm波长处测定OD值，以是茶P/N值为

7.1.3比票1gG端报过氧化物脂结合物的滴定：在包被有批原的板上演加120的用性血建积阴性血 清各一始，热后加不间稀释的等结合售，以最高的释度的属结合物显示P/N省为2.1一2.5者为继合物的滴度，

7.2试验程序

7.2.1用pH9.6的包教解聊批原.加在骗标板上，每孔50p.4C过夜.

7.2.2试验时，取出板，将孔内防源塞液用排-用PBST洗三次，甩干.备用，

7.2.3用能师级冲将待检盘清作1100第释，每孔50L.每份血济加两孔，同时每狭板加1100的阳性血清或别性业清各润孔作对别，置逐盒中.37C1h.

7.2.4用PBST铁析三次，每孔加50μ1-用PBST作1 1500臀释的脂结仓物，置覆盒中，37C1h 7.2.5用柠瀘酸级冲硬将底物母液ABTS作1100据释，每孔加100μL.37℃10min~30min特阳 性血等充分显色后每孔加100pL 2mol/L 载服降止皮皮，

7.3随果列定

类414mm披长处岗定0D值，阳性、领性和背摄血消计英出2孔的平均道.

判定标准待测业情的OD银（P)与时性龙清的OD值（N)之比（P/N值）小于2.1为持强盘

8WesternBe绿作E序

8.1SDS藏胶电泳

8.1.1准备电珠的碳璃变层、根据生产厂家的认研变装攻璃额，井改在水平位置.

8.1.2尽快风电球破端夹是网覆人至离板于下1.5cm处，性意资均匀，胶成一直战，胶表面有气施，立即用增有一思龙管性射等把气拖星出，然后轻轻加入少量dHO于家表面，要均勾，保持胶表面成一 直线-胶像好后，量于室湿22C~25℃至少45min以上.

8.1.3指上层胶（排唱胶）前把下层胶表面水吸出，再加人4HO號一次.

8.1.4准备上层欧（账辖胶）.配制见期录A，配好后立即加在下层胶（分离股）上面，赞慢加人避免有气天使用，

8.1.5等上层胶（格增胶）碳图后，取出杭子用无高子水种扶加样植孔，将减控放人电冰精上.上下棚 均加人电林缓冲核，栓查是否理漏，能两发票板问服胶底部的气池，并用电源缓冲推冲统院孔.

8.1.6准备即样，第一.二行为低标准分子量和高标准分于量置白（可额先准备分嵌冻存各用）.其他各 行融据试验需要准备：

8.1.7对各批原测定强白推度，计算好样品量，标明.按量致人一小试管内，加人等量的2×标本级冲 液、充分用吸管激匀，便病资疆碎，轻轻盘上胶塞，放人佛水内建佛90s.加人澳盼蓝度5p1.~10p1

8.1.8披激计算量用型管轻物加人加神礼内，米使用时孔要用电脉缓冲液填病.

8.1.9电院.开始时电压为8V/cm疑胶，特染料进人分高胶码，将电压增加到15V/em截度，唯续电直财染料面达分高波鹿都，天闭电都，取下程胶，

8.2蛋白转移和抗单抗体试量

8.2.1自转等

膜在转移缓冲液中提施3min~5min.

8.2.1.2特整料支架平放在含有转参缓种雅的托盘中，在型料支架上孩一校绝，

8.2.1.3把经电泳完毕的破囊夹层取下，放于内有签子纸的盘内，轻轻起面层玻填（如胶粘着上层填下不案，则用吸管蛋暗疫把款冲下）.量腔长，并作记录，

8.2.1.4将三块湿纸对齐放在海绵上，依次放置纤排累膜、凝胶，另外三块纸及海强，在放置每一层时.均要去除它们之间的气账，若有气旅残器，则影喻转移敏果，最后用整料支架类紧上述各题，放入 电转研模内-注意纤能素胰一据基正程.胶-例著负税强酒电路电压40V 电至0 37A~0.2A 转移1. 5 b~$ h

8.2.15转移结来后，取出型科支架，依次去摊各星，用铅笔在胰的上缘作好标记，初下其中一个孔对应膜的二分之一，用氨基染色30x，10%乙酸脱色，检查转移是否究全：也可将转够后的凝胶作考

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1169-2002

猴沙门氏菌检验操作规程

Protocol of examination for salrmonella in monkeys

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标理的实验方法是在参考国内，国外实验室的检验提程和总结了多年的实践制定龄. 本标的附录A、附录B为规夜性院录.附录C为资料性附录.本标座由国家认证认可位督管理委员会握出并日口. 本标准起草单位：中华人民共和国云南出人境检验检疫局.本标准主要起草人，亚、育录寿、徐维加、周婴、赵. 本部准系首次发布的检验检疫行业标票.

猴沙门氏菌检验操作规程

1

本际塞现定了猴沙门氏置的检验方然.本标准适用于家沙门氏当的检验，

2范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用百或为本都准的条款，凡是注目期的引用文件，其随后於修改单（不包括整误的内容）或修订版均不适用于本标准，然首，最助根据本标准选或协议的各方哥究 老否可使用这些文件的最影版本，凡是不性目潮的引用文件，其最新新本近用于本标座.

GB4784.4-2994食品置生B学检秘沙1氏菌检验 G14789.28一1994食品微生物学检验色法、场费基和试GB/T6682-1992分析实验重用水线格和试验方进

3设备和器材

3.2天平. 3.1温箱.3.3显微锁， 3.4无房样拭子.3.5接种环， 3.6软我片.3.7试管. 38三角瓶.3.9试管景. 3.10氧糖灯，3.11平级.

4增养基和试剂

4.1GN肉狮，按GB478k.25-1994中4.17 规定.4.2L.5C肉据，推GB4789.28-1994中4.16规宠， 4.3甘疆冲液：无院录A4.5S5球期养基：按GB4789.28-1994中 4.22规定. 4.4Hej样品保存额：见时录A.4.6DHL蒙脂培界基，技GB4789.281994中 4.20规定. 4. 7豆碱貌 (1B5)腺错编布M步 G3 4789. 281994 中 4. 19 规定 4.8HE非瘤格美基核G84781.28194中4.21规定、4.10糖发培界基：按GB4789.28-1994中3.2握定.

SN/T 1169-2002

4.12革三氏染色腾：按GB4789.281994中2.2翼定.4.13门氏图让断血请，由指定单位换供.

4.11氧化辨试别GB4789.2819H中3.18定.

5检疫程序

见阳承B

6换作步

6.1采排、运输和保有

6.1.1将灭菌棉拭子用增鲁成生理拉水显润后直肠采样诚采取新鲜类便，放人GN肉细和梯拭于真接验布于选择性平板培养基上，

6.1.2样品采氟后需冠还远检的，可保存于什油暖冲液成Hajnu评品保容硬中，保存时间不超过72h，

6.2增蒸养

将GN肉536T±1C4h~8 h格界，取1mL上建样人9mL5C增密展中36C±1℃级苏18 h~24 h

6.3选择性分离

用门棉拭子划线分高，35℃±1℃络养18h~24h，医塞各个平板上的面海形，涉门氏面各亚 用SS玻脂和DHL BS HE WS琼猪中任选一，对上述选样性增面典扬植造行划线分离波直接种的菌态兄表1

表1涉门氏在不同选择性平板上的置特征

风1、8DVSSH0 无色幸酒明：严北营特，有的中心 零基色，但不细其他地季基别显 DV相用表身阳在的著标为称色中心母属色恒中心无医色形成时与大肠艾看民DHL 元色中通：产化中心色式 S排艺银用性式明性的排与更1.、手业色 [.V相用元阳性的额株为参红他-中心 特民色HEE座 蓝储色或色多数路际产吃化客酒中 性的茶为黄色中心成凡子全WSRS 心或儿平业员台 成也心属色成几手全员也B588 累色有企属先单广武化复前限为西色有业属光年，标揭色项围维养基不变

6.4生化试验

6.4.1挑取选择性难别干板上的可疑图每.模件于三榜银新医形速结井基，一般应挑4个一5个出、以防漏检.36℃±1C培界 18 h~24 h

6.4.2我赛三榜候腺斯路界基的反应，联行面科管见属种的反应结果见表2，

82 肠科菌科各英在三糖铁感由内的反应继票

PK / 可能的值机价 " / 沙门氏国目.男开地瓦柠服杆菌，番通至面" "" / " 胶杆真 大肠民菌.杆医国.克营的氏属国、沙门氏真.养劳地氏行票注，影性：一用性、/一多数用性少数所性.

6.4.3在三糖饮料面培养基有斜面产额为网时碗化氢用性和度层不产额的菌标可以列门氏菌初性，其他的反应地是氧化鹏试验，氧化附期性的培养物，报告为沙门氏菌别性：氧化腾阴性和革兰氏身色性的墙养物进一步进行生化塞定.

6.4.4胰种蛋白陈水（供能基质试验）.pH7.2果素球脂，氟化钾络养基和赖氨酸脱鞍酶培养基及对顾培界基各一管，于36C±1C编养18h~24h.必要时可越长至48h，按表3判定结果，核反应号分费， 纱门氏离黑的结果应翼于125.其佳反次结果报告为门氏重开性.

表3 服杆面科各属生化反应初步基别表

化氧 尿素 " " " 2 * " -4 5 " " " - 通安形行制- "" " - 车沙门成志贺氏老7 " - " /= - - /- f 生：阳生：一时性：十/多量期性、少量病性.

6.4.4.1反应号1.典量反应判沙门氏通属阳性，如原素、氰化和氨腔税规购三项中有一项异常， 按表4可列为沙门氏画，如有二项异靠，则技反应号3判为弗劳地氏柠额酸杆前、

表4

pHT.2E 化界 列定站票" - -- 沙1开器个别发师(菱求企消学享空组果)

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1156-2002

进出境瓜果检疫规程

Rules for the quarantine of importing and exporting melons and fruits

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本称准止国家认至认可监暂管理委员会员出并归口. 本际准图车单位：中华人民共和国广州出人减检验检疫局，本标准主要起京人：梁帆、爱广勤、杨国寿、英佳款.

进出境瓜果检疫规程

1范围

本标准适用于进也境水果类、瓜类、而科族集和指产科能案目类瓜果的检疫， 本都准规定了进出境瓜果的检疫方热及检疫结是的评定，

2仪墨及用具

立体显微键、显骨模.放大、摄于、小刀、折形管、品款，

3检疫依据

3.2输人国家减地区进境核物检疫要水. 1.1中国助定的核物检疫要求，3.3政府间取边幅物栓疫持议、次定书、备忘录及我国非加地区性或器际性公约织应播守的规定， 3.4贸易合网、值用证等有关植物检疫要求.

4检疫准备

4.2程据进出境瓜果的种类及可能感染的病生明确检疫重点，

5现场检疫

5.1连备检疫工具，如缴大镜、小刀、疑子、指形管和样品营等，

5.2核对单运、品种、数量、产地、包装、硬头等内容是否党证相符，有指定果团的要对产姓、果图和包猴厂进行模买，

5.3抽查

5.3.1查方法

用机方狭进行独查，

5.3.2抽查作数

5.3.2.1我量在30件下的（含10作）.全部验查.5.3.2.2批量在10件以上的，按表1所到的比何抽查.

表1轴查比例

推量/特 推查/(%) 各注J0以下 I01~-330 10~5 10 每性性兼件数不步十10件1 0612 000 501~1 000 300900 3~ 54 }2 eti~6 000 5 00 以上 1-0.3 2~1

SN/T 1156-2002

5.3.2.3发现可疫情，可适5理加拍查件数，

5.4取

5.4.1取排方法：取样结合抽查连行.

5.4.2拍取样品的数量：院表2的比例抽取代表排品，

表2样比例

批量/件 样品售量/份 1 每份代摄样盈的重盘为2kg-10kg101~300 1~1000 t~105 006~108 3~3 -41 001~2 900 4~52 0615 90 1 000 E上 7

5.4.3发现可疫情，可通当增加拍求特品的数量.

5.5环续检痘

检查运载工具成货物容放析新地，民周环境卫生，有元害虫活站.

5.6开件检查

对推查的贷物，开件时注意检查包装物密部，四用，继有无害虫供论：值能放大说检查压果表面推查，对发成的期卖等有客生管做们步的量别，发现有考盘我可就身定的或有并管影态的基实应找买实验室做进一步的检验和签定，

5.7木质自装材科检查

有本质包装材料的如水托盘、水箱号需梭查有尤林水病虫害.

6实验室检验

将现场拍取的样品或发属可能查状的样品进行重内病业检验，

6.1虫害检验

6.1.1表面检验

仔相藏察或助解剂硬拉查示果表面显有无粒孔、排准物成产即孔等为客状，

6.1.2果检验

将果实期开，检查果内果核是否有害业，

6.1.3墙养检验

在适宜的提度条件下将样品置于室内成生物地养箱内培疗，经一定的院间后，再检查是否有害业.此方族运用于瓜票中的虫即和机能期的动业的检孜.

6.2病资检

6.2.1直接情检

提取群品中发观病变查状群分-制成碳片置于星微镜下检查和基定.

6.2.2分离培养检拾

将发现可疑痘状的样品进行表面灭置必要时器用无类水冲选陵不同的分高目的和对象，移植于相应的培养基上，进行培养分离检查.

7结果评定与处置

7.1皓果评定

7.1.1合格评定

7.2合楼、不合处置

7.2.1检疫合楼必置

7.2.2检疫不合处置

检疫结果符合第3章要求的，评定为合格，

检疫结果不养合第3靠要求的，评定为不合是.

对检疫合整的进出境瓜采，尚具相应的证单放行，

7.2.2.1有有敬除害处理方法的，通知货主或其代理人按检夜处理标准进行验害处理，处理会格应，出其相应证单款行.

7.2.2.2无有微除害处理方法的，进境压果作遮其成销级处理，出具相应证书对外索赔，出境凡果不准出境.

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1151.5-2003

对虾杆状病毒（BP）检测方法

Protocol of detection for Beculorirus penoei

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前盲

本标准是采用O1E的（水生动物健康手册32000年级的检疫规程， 本标的附录A是性陶录.本称准由国家认证认可监督管理委员会民出并街口， 本标准起草单位：中华人民共和国保携出人境检验检疫局，本标准主要配车人，江育林、陈有购、插净水、实秀态.

对虾杆状病毒（BP）检测方法

本标准现定了用直接是据续装检和用聚合酶链式反应（PCR）技术检图对虾杆状病毒的方法. 本标水适用于对寿托状病毒的签定及本病的孩行病学调查，非断、检疫和监树.

2规范性引周文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是饮目期的引用文件，其随后的修改单（不包据助误的内容）或修订版均不适用于本标座，然面，致助板题本标准这成持议的各方薪充 是否可使用这类文件的最新原本，凡是不注日期的引用文件，其最新息本适用于本标准，

GB/T 65821992分析实验室用水规格和试验方提（eqv ISO 3696 1987) GB/T18088一2000高人境动物检疫采样SN/T 1151.32002爽节对虾开批病靠(MBV)董方接

3试别和材料

3.1阳性病毒DNA：由OIE参考实验室提供或由图家质量置督检验检疫总局指定的实验室提供.3.3Taq腾：一20℃保存，不要反复冻随收温皮测我变化. 3.2水：应符合G/T64821992中→级水的现格.3 4 dNTP S dCTP dGTP 4ATP dTTP 各 10 mmsl/L 3.5引物，有二对引物可选用，使用时能度为40μmol/L，其序列如下：BP1F;5′-GAT-CTG-CAA-GAG-GAC-AAA-CC-3′ BP1R;5'-ATC-GCT-AAG-CTCTGG-CAT-OC3′F8 HB基BI中B 560 bp 片段 BP2R 5'-ATC-CTG-TTT-CCA-AGC-TCT-GC-3*F增 H M基W 中的 SB0 l 片& BP2F:5'-TGT-TCT-CAG-CCA-ATA-CAT-CG-I′3.6并内账：分析死使用前预冷到一20℃. 3.7物要求无DNA酶和RNA.3.9那品级冲渡，按使用说明书中规定的比例与样品祝合. 3. 8DNA 分子量标指(Marker)

4器材和设备

4.1PC3扩理仪4.2电仪. 4.3款量移限新及发失.4.4紧外积察灯， 4.5世盈培箱，4.6香通冰都和低国冰精， 4.7电动匀累据.4.9高心机和有心管. 4.8香通显微境，4 10剪刀级子.

5直楼光学层批银检查

5.1原理

在研族整中形成的有特征性的三角形包量体. 非后的（鲜活的，医死的或有视伤的）对好的肝族，或者用农集到的典便样品做醒压片，我账BP

5.2新解阳职温片活

须是品虾，取出肝展服，动体在解到键下样肝族原携岛，置于载玻片上，小心地别备压片，用相差成亮视野显费锁检查，在肝族疫中最的是压片中，妇果民察到上皮组胞的较内有单个成多个四买 的包猫体，就可以诊断为BP感案，包抛体业目面体或全字塔形，从金字塔底部到顶邮的尺寸为0.1μm~20μm之间，大多数看直时长度为8μm~10pm，可与MBV的球形包提体明量区分开来.

可以按所SN/个1151.3一2002中的方法保组积切片后进行光镇锁检包加体.

5.3真便检查

共便检查可在不票死对好的情况下栓置对断是否带有BP，该方法适用于推虾成大一些的对好-在用非致死方接检查有经济价值的亲好时特别运用，把对师放在水氯箱、产师箱或其他合道的水箱中待数小时，宜到水底部出现费使.用整料红很管取排型物，改在我璃离心管中，把典便制成湿片，直 接用显微镜检查包涵体，BP的包热体是明显的带折射的四面体-高度在0.1μm~20μm之间.

6聚会酶链式及皮（PCR）

6.1#品

用收集到的粪便样晶，取活的对虾所族服或保存在好为的乙整中的对虾肝胰腺样品都可以用作PCR相别的棋析.

6.2DNA技摄

现牙签或微量张管头把样品分款开来，神品在暖冲模里被分款后，60℃加热1h，然后95℃处理10min 12000g离心2min.把上清液移到一个新的微量管中，然后置于冰上保存.

每取800yL情化后的样品，在含有样品的真心管中加人400xL推握液1（见是录A），宽分提匀30 s 12000 r/min高心5 mim，取上层水额（均700pL），再加人650yL推提被2（见魔录A)，充分提匀30s 12 000 r/min 爽5 min-取上层水相(帅 600 pL) 开排人1.5 倍排8的元求乙醇(特 900 pL). 例置数次混匀后，20℃.8h以上以院浆技酸，12000r/mim离心30s 开去上清.干.后加10pL元

6.3PCR

用PCR检别BP时.每个抽要样品要显3min，使DNA变性然后放在冰水中选速疗即、航后他冲道（见胞录A)10pL.25mmel/L的氨化键（MgCl)10pL.水到总体积为100pL每管加人 50pL物油，短时间低速高心让矿物推量中在上层，再界反应管置于PCR扩增仪，94℃下处理反应温合物3min后，开始30个衡对（顿酸变他94°℃.1 min引物退水60℃、1mim，延72℃1min）.然后 72℃下延伸5min，最后4℃保器，合成特PCR反应产物可通过2%琼图糖电银与标准分子量进行比较.

6.4立对路

毒的对虾肝胰腺组例或荷便作为阳性对展（可以星已如的病事DNA核酸）.取心知得性的对好肝胰腺 在6.1中的样品姓理过程中必须设立阳性群品对肤别性特备对、空自对账.取已知含有BP房运织或费便作为别性对照，取等体积的水代格视板作为空白对预.

6.5星脂输电泳

入水平电泳理，使电缓冲链刷好改脱面，拨比例将样品和种品暖冲额图合点样.在电源时设立 用TBE电源缓时液（无脂录A）配2%的维脂糖（含0.5ng/mLEB，期录A）子板，将平板放DNA标准分子量 Markar作对册，推募使用pUC19 DNA/Msp I （HpeI).5V/m 电球约0.5 h，当 澳酸盛到达底部时带止，在累外灯下或核融管.

7果判促

别性对图和空白对照我有该核服特，持舞样品电球后在和应位置上有带者为阳性，无零成带的大小不 PCR后用性对照会出现一条560b（高用指物BP1时）成S80b（药用引物BP2时）的DNA片段.对的为回性，

用上述任例一种方法（如所银腺组积的驱片压片继或典便条的湿片披或PCR）都可以对BP感染作出确诊，因为P在肝孩腺中形成的包颁体银明显并且形志位星特异性，用光领直被成察新样品， 减键检需定并些常规影备们片的科品容对以容看到它们.

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1151.4-2003

对虾黄头病毒（YHV）逆转录 聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法

Protocol of reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)for yellowhead virus of shrimp (YHV)

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标事由围家认证认可警营理委员会据出并日口 本析准的财录A是风性附录，附录B是资料性附录.本标准起草单位，中华人民共和国深制出人境检验检疫局， 本标准主要起平人：刘症、史秀当、商险英、江育林.本标准系首农室布的检验检疫行业标座，

聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法 对虾黄头病毒（YHV）逆转录

1范围

本标准通用于对虾贯头病而的鉴定及其行病学调查、诊新、检疫和监剪. 本标准发定了用逆转录果会脂健式反应性水检别对好黄头病的方法.

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用用成为本标准的条款.凡是往日期的引用文件-其随后所布是否可使用这些文件的最新板本.凡基不注日期的引用文件，其量新版本温用于本标准.

GB/T4682一192分析实酸室用水城格程试貌方（eq1SO3696:1187)

3试拆和材料

3.1水：应将合GB/T66B一1992中一级水的规格.3.2Tag附，一20℃保存.不要反复冻融或温度西变化 3.3逆转录酶AMV：一20℃保存.不要反复感融或照度别烈安化.3.4核糖额酸酶抑制剂（RNasin）：一20℃保存，不要反复冻融或蛋度变化， 3.5 dNTP(含 dCTP dGTP dATP dTTP 各 10 mmol/L) 3.6引1务像度为40μmol/L、其序列如下 上册利物 10F 5'-CCGCTAATTTCAAAAACTACG - 3′3.7身丙量：分析.使用前到冷到一20℃. 下静引I鲁 144R:5′-AAGGTGTTATGTCGAGGAAGT-3′3.8物图：K求元DNA和RNA.242 bp 190 hp 147 bp

4材和设备

4.1PCR增仪.4.2电移织， 4.3微量募液器及头.4.4累外属察灯. 4.5短湿培界箱.4.7电动匀舒、 4.6香通冰箱和低温冰箱4.9制冰机. 4.8高心机和高心管

5联排和制排

5.1取样

SN/T 1151 42003

5.1.1非新解的对虾息织作为样品，处理前要将群品放在冰上，如果2h以后才据处理，宜将样品保 存在无水乙雕中，元水乙赠体积是品体界片10以上、可放置在室温下保存4个月，应游巴特品需保在-7℃.

5.1.2对于仔虾成限师，取整只师减好头作种品，取虾头时，用天图药刀都疆子出除限哦、头购甲、所

5.1.3对于成账，取都拉，淋巴器官或虚淋匹作为品.

5.1.3.1歌邮就时，用灭要剪刀剪去头高侧的头购甲，出懋就，然后形身刀剪求丝.

5.1.3.2取游巴器官时，基除去头部以后的部，差切除头胸甲族方的嫌部，从头胸甲中间，将头换部分为两那分，是群出内部的国织器官，在置的想侧、开拥的后面，家出自色，显二观片状的游巴器言，后在针管猫进上一个26号的针头，新位对街，使膜部朝上，将针头水平地销人第一和第二对器足之

5.2制样

再加人150yLCTAB据糖（乳财录A中第A.2.章）.用小务刀务码-然后用均浆券将样品均某成状. 在15C下，在1.5mLPCR管中首先加人25mg~100mg组织或200La屏巴柠攀酸盘提合度，再加CTAB服糖期900μ 现勾置于25℃作用2h

6YHV酸的盛定

6.1核的班

09上基水根，然后加人1.5售体职物20C无东乙那.润句后，20C取置6h以上 15000r/mm高心 30min，资上得，2甲用建纸发干，37℃干燥20min.最后加10pL.水溶解后，作为PCR模板.

6.2变性和退火

在PCR管中规人10 1.模板指5μ2引物(上要引1物称下静引物备2.5xL) 置干70℃成皮5 min 立非冰指低速高心购5s复微体要中在层部.

6.3cDNA合成

新我（2oU)4.5yL.无菌高水1.5pL.再硬显50pL矿物我. 在上述反应管中继续加人dNTP2 μL5倍还转录酶缓呼核（完附录A中第A.6章)5L RNA排

心.42°℃60min反应制备模驱的cDNA，反皮结来后，70℃、10m灭括还转录酶，立肆冰签. 将 PCK管置于 PCR扩增仪 37C反定 10min后 再加人1L 逆转录酶AMV(20U)并氨进离

氯化硬（MgCl）（孔肥录A中第AL8章））0p1.10他Tq肠浓能强冲液（尼附录A中第A.9章）10L加求期息年积 100 xL

混匀斯低速离心，让矿物独在上层，再将及应管置于PCR扩增仅，先94℃、4mi，再开始35次错那c被能变性 94℃ 1 min引物逼火 58C1 min其种 72℃ 1 min)选尼 12℃下能特 10 mit 最后 4℃ 保痘.

6.5立对润

5.5.1在61中的样品处理过程中必领设立用性样品对理.阴性样晶对质空白对整.

6.5.2取告有己知YHV的病毒标塞栋的对舒组织总被作为阳性对用（阳性对航物血国家质量验管检 验酸疫总局指定单位现供）

6.5.3取正管的对好组织拍指权量作为前指对片.

6.5.4取等体积的水代答要板作为空白对照，

6.6晾整电泳

A.6章）平板，将平板胶人水平电珠槽，使电涨缓冲液洲好俺投股瓦，将6pL棒品缓冲液按比例提匀 用TBE（见附录A中第A.5章）电涂级冲液配制2%的球腺糖（含0.5pg/mLEB.见附录A中第后加人举品孔、在电腺时设空DNA标准分子量作对量，5V/em电据均0.5h.当该数蓝到达底部时 特止.

7能果判定

7.1在禁外灯下观账核股语并列断继录.7.2PCR系限性对照金出现一条135bp的DNA片数，用性对照和空自对照股有该核票管.7.4无带或带的大小不是135bp的为明性. 录B）进行比获，序列都似性在5为以上，可判新得男样品结果为阳性.

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1176-2003

进出口超扭曲向列相液晶显示器件 检验方法

Methods for the inspection of super-twisted nematic liquidcrystal display devices for import and export

中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本指准由医家认证认可监餐管理委员会提出养有口. 本标准起率单位：中华人民共和国吉得出人境检验检疫局.本都为首次发事的检验检变行业标准. 本都准主要起章人：王朝晖、受笑字、育所磊.

进出口超扭曲向列相液晶显示器件检验方法

1范图

定值，本标康不作或定. 本标座规定了超扭自向列旅康品显示题件的梭验方此，对评价效品显示器件性面的各实参数的限

2规范性引用文件

下到文件中的条款通过本标掌的引所面成为本标准的条款，凡最生日旗的有用文件.其随后新有的修改单（不包拉助谈的内容）或修订版地不适用于本标准，然面，就助根题本标感达成协仅的各方哥究 是否可使用这些文件的量新版本，凡是不继日期的引用文件，其意新期本适用于本标准.

工 GB/T2828逐社检查计数排样程序及轴样表（运用于连续批的检套）GB/丁4619液晶星示器件赛试方路

3承需和定文

下列术活和定文适用于本标事，

3.1

赵狂向到相源最显示per-twisted sretic liqed crystal

交获品的无双折套特性真实现的整示， 液晶分子在配置有量振片基板间是螺能状扭推排列担自角合于180~270之到，和用外加电场改

ZE

检能tbelch ofinpectieo

进口橙验在周-合同、同一提（运）单项日下、面汇紫的网-规格（举号）产品.

标准光源 Astandar souree A

色提为2 56K的通明孩壳充气的型灯

3.4

标准光函Ctandard souree C

由标重光家A和 DG盏光器组合首成的包显为 6 774 K 的无象.

3.5

对比scoutrast ratie

在规定的用列及观塞角度条件下，被晶像索造通（造择）状志和书选通（非造择）状态亮度之比

角viwing ag

对比度大子星一可读氨的观账角度.

628海值电压 扣也能电压hresold voltage an ialuratiea valtage

SN/T 117E-2003

就量，称为周值电压U，网胖，亮度的安化选到单大变化量的90%时（不包括变）所对应的驱动电压 就晶是示各件基示部分亮度的变化达到最大变化量的10%时（不包括通变）所对应的器动电应布有做，称为胞和电压U

3.8

响应时间respense time

在阶新响应中管出信号达到稳定值的特定薇国的时间，包指开启时间和关闭时间.

变化这到最大变化量的10%（不包括观交）的时间润隔，称为开启时间，从进通（选择）电压跳变到非 对于正检题示器件，只非选遇（非选择）电压航变到选通（选择）电压开始，亚进射（或反封）元的亮度预-为关风时间tg 选通（非选择）电压开始，至造射（或丘）光的亮度变化达到量大变化量的90%（不包括确变）防时间网

对于免性显示要件，财与正作显示器件相庆.

4抽神

4.1拍样象件

进口产品在网一合间网一提（通）单项目下，投规格（型号）随机推取.出口产品生产单位应提交产品有效的型式试验服告，提交的检验批淡经厂检合格.

4.2抽样方案

4.2.1直现检查

按GB/T2828正省检签一次换样方案，特味检查水平S4

4.2.2管电光性解检测

按GB/T2828正管检查-次挂碎方案-特球检查水平S-2

4.2.3不含格品分类及合基质量水平

B类不食格品AQL=1.0C类不合格品AQL-2.5

4.3帕料方法

从检验批中随机拍取样本，

5

5.1环细要求

除非务有规定-有的检润应在GB/T2421规定的标准大气条件下进行. 环境蛋实，15℃~35℃相x显度25%RH~75%RH大气 压力:85kPe~106 kP

5.2检别设备的椎度婴求

各种检测设备的综合议差定小于被到量允许误差的三分之一、检测时家选用合通的量程.除事务有规定-电气图量仅表相度等级您不线子：提人直续电路的仅表：1.5级： 接人交能电路的仅表：2.5级：案量小于10p.A 的仅表：2.5级.

5.3所光源

扩数角度不应大于±19° 除非另有规定.黑明光国应符合国际烈明费员会（CIE）规定的A、C光图，开应使期平行光束，其

元图不应影响进测是示香件的最定温皮.

5.4直话电源

直院电电压能纹系数不大于土1%，稳定度不低于±1%.

6检验

检验分为直我检验和意温电光维能检别，必要时，可对进口产品进行型式试验，

6.1直观检验

直现检验的检验项目、不合垫内容、检验方法、不合格分类见表1.

表1直观检验项目及内容

不合种内容 不会格品分类 B 检验方级气池 因，最使液品屏内严生气池的 8外现肤品 EK 与告录款色不提称的其他态出死的 品屏原不习匀候待色买有服我别 c千异物四可后的点址 非面有行损，到的，可视区内存在新 品显示器件奶分显示或是示不单定助 B 找妮路 分业示，电证大龄 B正常方肉的对比度的 品星示都分在其他方内的对比度大子 c现者显示除针五状现的 可机容列品是示邮分出现病内凹驶成被晶星示图形与受计固形不养的 B 读数足查镜

注：外现肤熟检输开境要求加下

显客在高.抢验老的限提植检示件30m 类光图光原度1000的费光切下，非工作批态.

6.2繁温电光性能检测

常退电光性值检测项目的不合格品分类均为B类.

6.2.1功柜电流

在正靠驱动电压下.使返品显示件斯有像索间时处于选通状态，用意安电流表预得通过试券件的电有微，

6.2.2对此度

列公式计算出被额量示器件的对北度. 在现定的照条件下，在最住机角象限内，得液品像素选通状态和非选通状态下的亮皮，并由下

(t)

CR-对比度：1选通状态下的亮度：

式中：

L非选通状态下的亮度.

Method for the determination of phosphorus in milk product for export

1主题内容与适用范围

本标准规定了使用分光光度法检验食品中磷含量的方法.本标准适用于出口乳制品中磷含量的检验.

2抽样和制样

2.1检验批

以不超过5000件为一检验批.

同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等.

2.2抽样数量

批量，件 1~500 最低抽样数，件 5501~1000 71001~2000 92001~3000 113001~4000 13 154001~5000

2.3抽样方法

按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启.每件至少取500g（或相当于500g的袋一袋）作为原始样品，原始样品总量不少于2kg.放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送实验室.

2.4样品制备

从每袋原始样品中取出部分有代表性样品，充分混匀，用四分法缩分出不少于500g试样.装入清洁容器内，加封后，标明标记.

2.5样品保存

将试样于-5℃以下冷藏保存.

注：在抽样及制样过程中，必须防止样品受到污染或发生含量的变化.

3测定方法

3.1方法提要

样品中的磷酸盐与酸性钼酸铵作用，产生淡黄色的磷钼酸盐，与氯化亚锡生成亮蓝色的络合物一钼蓝，于波长690rm处测定吸光度，与标准比较定量.

3.2试剂和材料

试剂均为分析纯，水为蒸馏水或去离子水，溶液除特别指明外，均为水溶液.

3.2.1 钼酸铵硫酸水溶液：称取2.5g钼酸铵[OHg)gMo7024°4H 0]溶于15mL水中，另将28mL浓硫酸加到48mL水中，冷却后两液合并，用水稀释至100mL.

3.2.2氯化亚锡甘油溶液（2.5%）：称取2.5g氯化亚锡（SnC122H0)于100mL甘油中，在温热水浴上促使其溶解，混匀后储于瓶中，可长期使用.

3.2.3盐酸溶液（6mol/L).

3.2.4磷的标准储备液：称取干燥冷却的磷酸二氢钾（HP0g)2.1968g，加适量水溶解，移入500mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀.该液1mL相当于1mg磷.

3.2.5磷标准工作液：吸取磷标准储备液10mL，用水稀释至100mL，混匀.该液1mL相当于100μg磷.

3.3仪器和设备

3.3.1分光光度计.

3.3.2高温马弗炉.

3.4测定步骤

3.4.1 样品处理

酸后灰化，直至灰化完全），取出，冷却后加入盐酸溶液（6mol/L)20mL，加热溶解灰分，然后用水移入100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀.

3.4.2标准曲线的制备

分别吸取磷标准工作液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8.1.0mL于50mL比色管中，各加入20mL水，2.0mL钼酸铵硫酸水溶液，0.25mL氯化亚锡甘油溶液，然后用水稀释至刻度，混匀，放置20min后于波长690nm处以零管为参比测定吸光度，并绘制标准曲线.

3.4.3样品测定

吸取样液1～5mL于比色管中.加20mL水，以下操作同标准曲线制备.

3.4.4空白试验

除不称取乳制品样品外，均按上述测定步骤进行.

3.5结果的计算和表述

按下式计算样品中磷含量.

式中：X一样品中磷含量，mg/100g：

C一从标准曲线上查出的被测样液中磷的含量，ε：

注：计算结果须将空白值扣除.

有效位数保留两位.数值修约按照GB8170进行.

4测定低限、回收率

4.1测定低限

本方法的测定低限为5mg/kg

4.2回收率（n=3)

磷添加量，μ 平均回收率，%5 10 96.09 99.6750 94. 40

附加说明：

本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出.

本标准由中华人民共和国浙江进出口商品检验局负责起草.

本标准主要起草人鲍晓霞.

本标准规定了出口生白果的抽样、品质、重量、包装检验方法及结果的评定.

2引用标准

ZBB31002出口白皮蒜头检验规程抽样

3术语

3.1外观：指生白果的色泽、形状、均匀度及洁净度.3.1.1色泽：指生白果的颜色深浅及光泽程度.3.1.2形状：指生白果的大小及本品种固有的正常形状.3.1.3均匀度：指生白果的色泽、形状、大小等的均匀整齐程度.3.1.4洁净度：指生白果外表的斑痕或附着尘土等污物对外观影响的程度.3.2气味：指生白果应有的正常气味.

4 抽样

4.1检验批

以不超过2500件为一检验批，同一检验批的商品应具有相同的特征.如包装、标记、产地、规格和等级.

4.3抽样工具

抽样时必须备置聚乙烯塑料袋和塑料薄膜布一块，1m²左右，取样铲、盛样袋要清洁、干燥无异味.

100件以上按式（1)计算；

H一全批总件数.

根据报验单所载品名、数量、包装、批次、唛头等与实际商品核对相符后，在堆垛上下、内外各部位以正弦曲线走向随机抽取样件，然后将每件样件打开后，从件内上、中、下各部位抽取样品约100g，及时装入盛样袋内，每批原始样品不少于2000g

注：在抽样过程中，必须注意产品的色泽、气味、虫害、杂质和包装等情况，如有异常，应酌情增加抽样比例及数量，必要时可以停止抽样.

4.6样品制备

将已抽得的全批原始样品倒于分样台或分样用塑料薄膜上，充分混合，用四分法缩分成二份各约1000g的样品，一份供检验，一份备查.

分样流程图如下：

混均的原始样品约2000g↑以四分法混存查样品和缩分称重约1000g不完善果及外观气味检验 品质检验样品 变质果检验约500g 约1000g 约500g杂质及粒数检验约500g↑悬浮果检验约500g

4.7样品保存

按4.6流程图取得的存查样品，应存放在阴凉处，妥善保存至索赔有效期满为止.

5.1外观品质检验

5.1.1.2乳胶手套.

5.1.1.3托盘天平，感量0.1g，称量0~1000g.

5.1.1.4天平，感量0.01g，称量0~200g

5.1.2操作步骤

按4.6流程图将供外观色泽和气味检验的样品倒于白色搪瓷盘内，轻轻摊平，先嗅其有无霉腐及其它异味，然后边混合边观察形状、色泽、均匀度和洁净度，按规定要求做出评定.

的白果轻轻摊平，拣出各类杂质，置于天平上称量（唯确至0.01g)，按式（2)计算杂质含量百分率A.

5.3悬浮果检验

按4.6流程图将供悬浮果检验的样品用四分法缩分至稍多于200粒，从中取出完整果200粒，倒于预先准备好的盛有清水的容器中持续一分钟，将浮在水面上的果粒取出，按式（3)计算悬浮果含量百分率F.

5.4不完善果及变质果检验

按4.6流程图将供检验的不完善果及变质果检验的样品用四分法缩分至稍多于100粒或200g，从中取出完整果粒100粒或200g并重复操作制备第二份样品，供作双试验.然后将其中一份置于白色搪瓷盘中，轻轻摊平，分别逐粒观察或纵向部开果粒检视，掠出各种不完善粒及变质粒，分别置于预先准备好的样品碟内，而后再分别计数或称量计算各项含量百分率，用同样方法取另一份样品再行检验.检验完毕后，取双试验结果的算术平均值，即为不完善果和变质果的含量百分率.按式（4)计算不完善果含量百分率S，按式（5)计算变质果含量百分率D.

m一试样量，粒数或名

6重量鉴定

6.2操作程序

6.2.1毛重：系按检验批总数的5%抽取，经校正的衡器过重，核算平均毛重.

7包装和标志检验

7.1.1外包装检验

封口是否牢固，封口不论机织、手工缝口均应缝线平直，稀密适度.

7.1.2内包装检验

有内包装塑料袋者，开袋后检查内袋是否破损，扎口是否良好.

7.2标志检验

检查外包装袋外刷印的标志或悬挂的标签上品名、批号、级别、规格、重量是否与内容物相符，字迹是否清晰完整，刷印的油墨有无渗入袋内污染生白果等.

8检验结果的数据处理及结果评定

杂质总量：0.1%；不完善果：0.1%；变质果：0.1%；悬浮果：0.1%.

8.2检验结果有效数字后的数值，按GB8170数值修约规则修约.

8.3检验结果的评定

8.3.1评定依据

定，不再复验，发不合格情况通知单告知有关申请人对整批货物加工整理.

8.3.3包装检验结果的评定

处理，不得出口. 包装形式、规格、标签、唛头、标记等不符合有关规定的，能通过加工整理达到要求的，进行加工整理合格后出口，不能加工整理的作不合格附加说明：

本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出.

中华人民共和国国家标准

GB/T 16484.1-2009代替GB/T 16484.1-1996

氯化稀土、碳酸轻稀土化学分析方法 第1部分：氧化铈量的测定 硫酸亚铁铵滴定法

Chemical analysis methods of rare earth chlorideand light rare earth carbonate-Part 1:Determination of cerium oxide content Ammonium ferrous sulfate titrimetry

中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

GB/T16484-2009氯化稀土、碳酸轻稀土化学分析方法》共分22个部分： 第1部分：氧化铺量的测定硫酸亚铁铵滴定法；第2部分：氧化铂量的测定电感耦合等离子体质谱法；一第3部分：15个稀土元素氧化物配分量的测定电感耦合等离子体发射光谱法：一第4部分：氧化针量的测定偶氮肿Ⅲ分光光度法；一第5部分：氧化钡量的测定电感耦合等离子体发射光谱法； 一第6部分：氧化钙量的测定火焰原子吸收光谱法；一第7部分：氧化镁量的测定火焰原子吸收光谱法；一第8部分：氧化钠量的测定火焰原子吸收光谱法：一第9部分：氧化镍量的测定火焰原子吸收光谱法； 一第10部分：氧化锰量的测定火焰原子吸收光谱法；一第11部分：氧化铅量的测定火焰原子吸收光谱法；第12部分：硫酸根量的测定：一第14部分：磷酸根量的测定锑磷钼蓝分光光度法； 第13部分：氯化铵量的测定蒸馏-滴定法；一第15部分：碳酸轻稀土中氯量的测定硝酸银比浊法；一第16部分：氯化稀土中水不溶物量的测定重量法；一第17部分：碳酸稀土中水分量的测定； 一第18部分：碳酸轻稀土中灼减量的测定重量法：第20部分：氧化镍、氧化锰、氧化铅、氧化铝、氧化锌、氧化针量的测定电感耦合等离子体质谱法：一第21部分：氧化铁量的测定1.10-二氮杂菲分光光度法；一第22部分：氧化锌量的测定火焰原子吸收光谱法； 一第23部分：碳酸轻稀土中酸不溶物量的测定重量法.本部分为GB/T16484的第1部分.本部分代替GB/T16484.1-1996《氯化稀土、碳酸稀土化学分析方法氧化铈量的测定》.本部分与GB/T16484.1-1996相比，主要有如下变动： 增加了精密度条款；一增加了质量保证和控制条款；一对标准文本进行了编辑性修改.本部分由全国稀土标准化技术委员会提出并归口. 本部分负责起草单位：北京有色金属研究总院、中国有色金属工业标准计量质量研究所.本部分由包钢稀土高科技股份有限公司起草.本部分参加起草单位：北京有色金属研究总院、淄博加华新材料有限公司.本部分主要起草人：吴广伟、张桂梅、马永亮. 本部分参加起草人：刘兵、刘延漠、杨霞.本部分所替代标准的历次版本发布情况为：GB/T 16484. 11996 .

氯化稀土、碳酸轻稀土化学分析方法 第1部分：氧化铈量的测定 硫酸亚铁铵滴定法

1范围

GB/T16484的本部分规定了氯化稀土、碳酸轻稀土中氧化铈量的测定方法.本部分适用于氯化稀土、碳酸轻稀土中氧化铺量的测定，测定范围：20.00%~40.00%.

2方法原理

试样用盐酸溶解，在磷酸介质中，高氯酸冒烟将三价铺氧化为四价：于稀硫酸介质中，在尿素存在下，用亚砷酸钠-亚硝酸钠溶液还原高价锰，以苯代邻氨基苯甲酸为指示剂，用硫酸亚铁铵标准滴定溶液进行滴定.

3试剂和材料

3.1磷酸(ol.69 g/mL).3.2高氯酸（pl.67g/mL）3.3盐酸（11）.3.4硫酸（298）.3.5硫酸-磷酸混合溶液：在不断搅拌下，分别将15mL硫酸和15mL磷酸，缓慢加人到70mL水中.3.6尿素溶液200g/L. 3.7亚砷酸钠-亚硝酸钠溶液：称取2g亚砷酸钠和1g亚硝酸钠于250mL烧杯中，加100mL水溶解，移人1000mL容量瓶中.以水稀释至刻度，混匀.300mL硫酸（3.4）溶解，移人500mL容量瓶中，用硫酸（3.4）稀释至刻度，混匀.3.9重铬酸钾标准滴定溶液c（1/6K:Cr:O ）=0.01mol/L:称取0.4903g基准重铬酸钾（经140C~ 150C干燥2h）置于250mL烧杯中，加100mL水溶解，移人1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀.3.10硫酸亚铁铵标准滴定溶液c[（NH）Fe（SO）]0.01mol/L：3.10.1配制：称取5.5g硫酸亚铁铵[（NH）Fe（SO）：6HO]于500mL烧杯中，加150mL硫酸（3.4）溶解，移人1000mL容量瓶中.以硫酸（3.4）稀释至刻度，混匀.极差值不大于0.10mL，取其平均值.3.10.3随同标定做空白试验.3.10.4按式（1）计算硫酸亚铁铵标准滴定溶液（3.10）的实际浓度：

3.10.2标定：移取20.00mL硫酸亚铁铵标准滴定溶液（3.10.1），置于250mL三角瓶中，加10mL硫酸-磷酸混合溶液（3.5），加水至溶液体积为100mL，加4滴二苯胺磺酸钠指示剂（3.11），用重铬酸钾标

中华人民共和国国家标准

GB/T 16482-2009代替GB/T 164821996

荧光级氧化钇铕

Yttrium-europium oxide-Phosphor grade

中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布

前言

本标准代替GB/T16482-1996（荧光级氧化钇铺》.本标准与GB/T16482-1996相比，主要变化如下： 一取消原牌号（Y，Eu）：O，以粒度规格分成三个牌号：调整了氧化钇销中销含量范围；调整了中心粒径值（D[V，50]）的范围.本标准由江阴加华新材料资源有限公司、广东珠江稀土有限公司负责起草. 本标准由全国稀土标准化技术委员会提出并归口.本标准由厦门通士达新材料有限公司、广东江门科恒实业有限股份公司参加起草.本标准主要起草人：史卫东、谢建伟、肖睿、金燕华、魏岚、黄瑞甜.本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 16482-1996.

荧光级氧化钇铕

1范围

本标准规定了荧光级氧化钇销的要求、试验方法、检验规则与标志、包装、运输、贮存.本标准适用于化学法制得的氧化钇铺，可供制作灯用稀土三基色荧光粉和彩色电视荧光粉等用.

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.

GB/T8170数值修约规则

GB/T12690（部分）稀土金属及其氧化物中非稀土杂质化学分析方法

GB/T14635稀土金属及其化合物化学分析方法稀土总量的测定

GB/T18116.1氧化钇铕化学分析方法电感耦合等离子体发射光谱法测定氧化钇销中氧化、氧化铈、氧化错、氧化、氧化、氧化、氧化试、氧化镝、氧化铁、氧化饵、氧化、氧化鲶和氧化鲁量

GB/T20170.1一2006稀土金属及其化合物物理性能测试方法稀土化合物粒度分布的测定

3要求

3.1化学成分

产品牌号及化学成分应符合表1规定.需方如有特殊要求，供需双方可另行协商.

表1

产品牌号 171140A 171140B 171140CREO.不小于 99.0 99 0 99 0（YO Eu;O /REO 不于 99 99 99 99 99 99EuO /REO 4~10 4~10 4~10La;O 0 000 2 0 00 2 0 000 2CeO 0 000 2 0 000 2 0 000 2Pr O Nd O 0 000 2 0 000 2 0 000 2 0 000 2（质量分数/% 化学成分 Sm O0 0 000 2 0 000 2 0 000 2 0 000 2 0 000 2杂质含量、 稀土杂质/REO Gd O 0 000 2 0 000 2 0 000 2不大于 Th O 0 000 2 0 000 2 0 000 2Dy:O; 0 000 2 0 000 2 0 000 2Ho;O 0 000 2 0 000 2 0 000 2Er;O 0 000 2 0 000 2 0 000 2Tm; O) 0 000 1 0 000 1 0 000 1

表1（续）

稀土杂质/REO Yb;0 0 000 1 0 000 1 0 000 1LuO 0 000 1 0 000 1 0 000 1Fe;0 0 000 2 0 000 2 0 000 2杂质含量. os 0 004 0 0 003 0 0 003 0（质量分数）/% 化学成分 不大于 Ca) 0 002 0 0 001 0 0 001 0非稀土杂质 CuO PbO 0 000 2 0 000 2 0 000 2 0 000 2 0 000 2 0 000 2NiO 0 000 2 0 000 2 0 000 210 0 01 0 01 0 01灼减，不大于 1.0 1.0 1 0

3.2物理性能

产品中171140A.171140B、171140C三个牌号的中心粒径值（D[V，50]）分别为6 μm.

3.3外观

3.3.1产品为淡粉色粉末.3.3.2产品应洁净，无可见夹杂物.

4试验方法

4.2产品中销含量分析方法按GB/T18116.2的规定进行，稀土杂质含量的分析方法按照 4.1稀土总量（REO）的分析方法按GB/T14635的规定进行.GB/T18116.1的规定进行.4.3非稀土杂质含量及灼减含量的分析方法按GB/T12690的规定进行.4.4中心粒径值（D[V，50]）的分析方法按GB/T20170.1-2006的规定进行，仲裁分析方法采用其方法1.4.5数值修约按GB/T8170的规定进行. 4.6产品外观用目视检查.

5检验规则

5.1检查与验收

5.1.2需方应对收到的产品进行检验，如检验结果与本标准规定不符时，应在收到产品之日起两个月 5.1.1产品由供方质量检验部门进行检验，保证产品质量符合本标准规定，并填写产品质量证明书.内向供方提出，由供需双方协商解决.如需仲裁，可委托双方认可的单位进行，并在需方共同取样.

5.2组批

产品应成批提交检验，每批应由同一牌号的产品组成.

5.3检验项目

每批产品应进行化学成分、物理性能和外观质量检验.

5.4取样与制样

化学成分、物理性能仲裁取样数量按表2规定进行.每件（袋）取样量不少于10g，将试样充分混匀后，以四分法迅速缩分至试样所需量，装人试样袋密封.

表2

件（袋）数 1~5 6~49 50~100 >100取样件（袋）数 件（袋）数的100% 5 件（袋）数的10% 件（袋）数的平方根取整数 取正整数

5.5检验结果的判定

化学成分、物理性能仲裁分析结果与本标准规定不符时，则从该批产品中取双倍试样对不合格项目进行复验，如仍有一项结果不合格，则判定该批产品不合格.

外观检验结果与本标准规定不符时，则直接判定该批产品不合格.

6标志、包装、运输、贮存及质量证明书

6.1标志、包装

6.1.1桶（箱、袋）外注明：供方名称、产品名称、牌号、批号、净含量、毛重、出厂日期及“防潮"标志或字样.

6.1.2产品分装于双层塑料袋或塑料瓶中，每袋（瓶）净重5kg、10kg.再将袋（瓶）置于桶（箱）内.每 桶（箱）净重10kg、25kg.如需方有特殊要求，则供需双方另行协商.

6.2运输、贮存

产品运输时严防淋雨吸潮，应存放于干燥处，不得露天堆放.

6.3质量证明书

每批产品应附上质量证明书，注明：

a）供方名称；b）产品名称和牌号：c）批号；d）净含量和件数； e）各项分析检验结果及检验部门印记：1）本标准编号：g）出厂日期.